雜交瘤細胞株；A6說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 雜交瘤細胞株；A6說明書
形態(tài)特性  淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

IKB zeta/MAIL protein  KB抑制蛋白激酶Ζ抗體規(guī)格: 0.2ml
S100-A9/MRP14/CFAG/Calgranulin B  S100A9抗體規(guī)格: 0.1ml
CD5L/Api6  CD5L抗體規(guī)格: 0.2ml
hnRNP R  異質(zhì)性核糖核蛋白R規(guī)格: 0.2ml
RASSF1A  Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體規(guī)格: 0.1ml
CD168/RHAMM  透明質(zhì)酸介導細胞游走受體抗體規(guī)格: 0.1ml
ARMER  ARMER抗體規(guī)格: 0.2ml
Classical swine fever virus, CSFV  豬瘟病毒抗體規(guī)格: 0.2ml
CC16/CCSP  克拉拉細胞蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
MAP3K9  絲裂原活化蛋白激酶3K9抗體規(guī)格: 0.2ml
Plexin A1  神經(jīng)叢蛋白A1抗體規(guī)格: 0.2ml
Casein  酪蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
CLDND1  膜蛋白CLDND1抗體規(guī)格: 0.1ml
Phospho-PFK2 (Ser467)  磷酸化6磷酸果糖激酶2抗體規(guī)格: 0.1ml
BIRC5/Survivin variant  細胞凋亡抑制因子5抗體規(guī)格: 0.2ml
ADAMTS10  整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶10型抗體規(guī)格: 0.1ml
PARP  多腺苷二磷酸多聚酶抗體/多聚ADP-核糖聚合酶1規(guī)格: 0.1ml50 次        柱式昆蟲 RNAout
20mg        MQAE( 氯離子熒光探針 )
10U        ATP 硫酸化酶
50 次        血液 DNAout
1mL        Rosetta(DE3)plysS 菌種
無機焦磷酸酶 ( 酵母 )    10U    130658-10
6nt 隨機引物 ( 抗水解 )，0.5mM    100μL    120679-100
200mL        Western 印跡膜抗體清除劑
10mL        過氧化氫酶
25mL        DEAE 瓊脂糖凝膠 6B
250 mL        戊二醛二甲酸緩沖固定液
吐溫 -20    100mL    CAS9005-64-5
F12K 液體培養(yǎng)基 ( 無血清和雙抗 )    500mL    19-0071-500
柱式血液 DNA-RNAout    50 次    120522-50
100g        瓊脂糖
5g        D(+) 木糖
5次        大提柱式真菌 RNAout
1mL        一步式 RT-PCR Mix 
生物素化的堿性磷酸酶 (AP)    1mg    131096-1
ROX 參考染料 II    100μL    100931-100
2mL        UTP 溶液，2.5mM