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人胰腺癌細胞;AsPC-1圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人胰腺癌細胞;AsPC-1圖片
形態特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 一個胰腺癌病人的腹水中的細胞移植到裸鼠后建立了這個細胞株。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR Amelogenin:X;CSF1PO:10,13;D13S317:9,12;D16S539:11;D18S51:18;D19S433:14;D21S11:28,30;D2S1338:22,23;D3S1358:16;D5S818:12;D7S820:12,13;D8S1179:13,15;FGA:24;TH01:7,9.3;TPOX:8,10;vWA:17
同工酶
染色體
使用權限 A類
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內出現任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
四氮唑藍 (NBT)250mg
CAS69-93-2尿酸25g
131094-25生物素化的牛血清白蛋白25mg
熒光尺1個
8- 氧代鳥嘌呤 DNA 糖基化酶80U
BL21(DE3)菌種1mL
140387-10EGY48 酵母感受態細胞10×100μL
磷酸氫二250g
鯡魚精 DNA 溶液1mL
DNA 尿素 -PAGE 上樣液1.5mL
接頭 DNA(Hind Ⅲ -Sma I)5nmol
90402-50蛋白膠微量回收試劑盒50 次
RNase-free Tris HCl,1M,pH 7.5100mL
動植物總蛋白微量提取試劑盒50 次
CAS9004-67-5甲基纖維素25g
DNA CTAB( 十六烷基*基溴化銨 )100g
CAS73-22-3L- 色氨酸5g
130985-100免 DNA 提取 PCR 試劑盒100 次
精胺1g2×YT瓊脂/2×YT Medium AgarBR250克國產/進口
抗生素Ⅳ號培養基/抗生素4號培養基/Antibiotic Agar NO.4兩性霉素B等藥品的效價測定250克國產/進口
NCI-H596(人肺腺鱗細胞)5×106cells/瓶×2
MGC80-3(人胃細胞)5×106cells/瓶×2
EL4(小鼠淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2
小鼠肥大細胞細胞英文名稱:P815
ER培養基/Eriksson MediumBR10升國產/進口
人肝實質細胞*培養基100mL
人脂肪細胞*培養基100mL
L-Glutamine (100X)規格:100ml
中性紅染色液規格:100ml
A9(小鼠下結締組織細胞)5×106cells/瓶×2
人食管細胞英文名稱:KYSE410
人鼻咽母系細胞英文名稱:CNE-2Z
SK-MEL-1(人膚黑色素瘤細胞)5×106cells/瓶×2
HK-2, 人腎質近曲小管上細胞
1640培養基/1640 Medium/RPMI 1640含L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉10升國產/進口
抗生素Ⅱ號培養基(PH7.8-8.0)/抗生素2號培養基(PH7.8-8.0)/Antibiotic Agar NO.2克林霉素、林可霉素等藥品的效價測定250克國產/進口
NCI-H838(人非小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2
AR42J(大鼠胰腺外分泌細胞)5×106cells/瓶×2
Acridine Orange(AO)100mg
131040-50人重組 AP1(c-Jun)50fpu
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