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快速分析中色譜柱的選擇 系列攻略彈:關于粒徑
近年來,在液相色譜分析領域,“快速分析”的話題越來越多被提起。而在2020年版《中國藥典編制大綱》中,也提到“積極倡導綠色標準和經濟標準,推廣采用毒性小、污染少、節約資源、保護環境、簡便實用的檢測方法”。
“快速分析”能帶來的好處有很多方面,例如,方法開發階段,提高分析速度可以節約分析時間;還可以節約有機溶劑、降低成本、保護環境,等等。
那么,當我們談論快速分析時,我們在談論什么?
快速分析的目的
● 增加每天所能分析的樣品數量(早點下班!)
● 謀求更高分離度(早點下班!)
● 節約溶劑,降低成本、保護環境(省錢!)
● 減少分析時間過長的項目耗時(早點下班!)
想要達成以上目的,可以通過提高流速、縮短色譜柱長度和內徑等方法進行分析調整。但是,如果直接縮短柱長或提高流速,可能會對分離造成不良影響,或使目標化合物無法溶出、洗脫。反過來說,選擇分離能力強的色譜柱非常關鍵。
那么,分離能力受哪些因素影響呢?說起背后的原理和實際操作之間的聯系,一篇文章可說不完~
因此,鴻朗又開了新的液相豆丁帖——快速分析中色譜柱的選擇系列攻略,希望能在結合實際操作的同時,和大家一起探討色譜分析背后的奇妙原理~
那么,今天將對快速分析時的關鍵因素——粒徑進行介紹~
01
粒徑
理論塔板數 N(柱效)= L / H
↓
柱效下降,分離變差
↓
為保證分離,應選用小粒徑柱
(3 μm、2 μm)
Van Deemter方程
范德姆特方程我們都很熟悉了:
H = A + B/u + Cu
A : 渦流擴散項
?由粒徑大小決定
B/u : 縱向擴散項
?流速越小數值越大
Cu:傳質阻力項
?與粒徑大小和流速有關
相比5 μm柱,3 μm和2 μm柱:
?在同等流速下,理論塔板高度更小
(同等柱長,柱效更高)
?即使在更高流速下,也能保持較低理論塔板高度
(高流速下,也能得到高柱效)
▲粒徑與柱長
樣品:
①地昔帕明 ②丙咪嗪 ③地昔帕明 ④阿米替林 ⑤*丙咪嗪
如上圖,分別使用不同粒徑、不同柱長的IF(S2)和兩款MGIII(S3和S5)色譜柱,對5種抗抑郁藥進行了分析。
可以看出,當粒徑由5 μm變為3 μm、3 μm變為2 μm時,分別對應150 mm、100 mm和50 mm長度的色譜柱,終,在同等理論塔板數的前提下,分析時間大幅縮短。
也就是說:小粒徑色譜柱能得到更尖銳的峰形和更高的理論塔板數;縮短色譜柱長度,可相應縮短分析時間。
那么,柱長和粒徑之間的換算關系如何呢?
分離效率:L / Dp
以L / Dp = 50000為前提,
250 mm L,5 μm
↓
150 mm L, 3 μm
or
100 mm L, 2 μm
↓
因此,為保證分離
在縮短柱長的同時,應選用小粒徑柱