激光掃描共聚焦顯微鏡是一種近代生物醫學圖像儀器,它主要用于觀察和分析細胞或組織內部微細結構的熒光圖像,以及在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號及細胞形態的變化。它是在熒光顯微鏡成像的基礎上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見光激發熒光探針。
激光掃描共聚焦顯微鏡(Confocal laser scanning microscope,簡稱CLSM)通過加裝激光掃描裝置在熒光顯微鏡成像的基礎上,使用紫外光或可見光激發熒光探針。它利用計算機進行圖像處理,從而得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖象,以及在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號及細胞形態的變化。這種技術通過增強對比度和提高分辨率,使得研究人員能夠更清晰地觀察和分析生物樣本的三維結構及其動態變化。
激光共聚焦掃描顯微鏡用激光作掃描光源,逐點、逐行、逐面快速掃描成像,掃描的激光與熒光收集共用一個物鏡,物鏡的焦點即掃描激光的聚焦點,也是瞬時成像的物點。系統經一次調焦,掃描限制在樣品的一個平面內。調焦深度不一樣時,就可以獲得樣品不同深度層次的圖像,這些圖像信息都儲于計算機內,通過計算機分析和模擬,就能顯示細胞樣品的立體結構。
激光掃描共聚焦顯微鏡可以從固定和熒光染色的標本以單波長、雙波長或多波長模式,對單標記或多標記的細胞及組織標本的共聚焦熒光進行數據采集和定量分析,同時還可以利用沿縱軸上移動標本進行多個光學切片的疊加, 形成組織或細胞中熒光標記結構的總體圖像,以顯示熒光在形態結構上的準確定位。 常用于原位分子雜交、腫瘤細胞凋亡觀察、單個活細胞水平的 DNA 損傷及修復等定量分析。
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