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慢病毒的感染效率受哪些因素影響?

閱讀:1650      發(fā)布時間:2023-1-6
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   慢病毒是一種有包膜的RNA病毒,直徑為80-120nm,呈二十面體對稱結構、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細胞的類型),再往里依次為基質蛋白和衣殼,最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒感染的顯著特點是感染個體在出現典型的臨床癥狀之前,大多經歷長達數年的潛伏期,之后緩慢發(fā)病,因此這些病原體被稱為慢病毒。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所有輔助蛋白。
  慢病毒感染效率受到多種因素的影響,首先,考慮病毒包裝制備是否存在問題,比如外源基因是否正確,病毒滴度是否合格等。其次,考慮病毒運輸和保存方式是否得當,解凍病毒一定要在冰上進行,避免反復凍融,否則會影響病毒滴度;-80℃保存半年以上需要重新測定滴度。細胞狀態(tài)對于慢病毒轉導效率也具有很大的影響,良好的生長狀態(tài)是達到高感染效率的保證,一般選擇細胞形態(tài)較好、輪廓清晰、處于對數生長期的細胞進行感染可提高感染效率。臨床慢病毒轉導用途關于慢病毒轉導的臨床實驗。
  基因治療的臨床效果取決于細胞的高水平轉導,雖可通過二次轉導或提高感染復數(multiplicityofinfection,MOI)增加轉導率,但延長體外培養(yǎng)時間可誘導干細胞進入細胞周期而影響其分化增殖能力;提高gan ran復數會提高插入突變風險和增加生產成本。因此,在不斷改造慢病毒以增加安全性的同時,提高病毒轉導效率是亟待解決的難題。慢病毒轉導過程的限制因素包括病毒黏附、入胞、細胞運輸及固有免疫作用。通過引入異源病毒包膜構建新的偽型載體和/或在轉導過程中添加病毒轉導增強劑(transductionenhancers,TEs),可有效克服LVVs轉導的障礙,增加轉導細胞比例,從而達到臨床需要的轉導水平。

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