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葡聚糖凝膠使用方法
閱讀：4987 發布時間：2016-11-2
1 乙醇浸泡
在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干。
2 無鹽水浸泡
室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹。
3 鹽酸浸泡
在常溫下再用0.1M HCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾干，水洗只中性。
4 裝柱
將溶脹好的凝膠根據裝柱要求一次性置入柱內，注意保持濕態裝柱，并避免柱內產生氣泡或斷層。
5 平衡
上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）。
6 上樣
凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調整；脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1即可。
7 洗脫方法
可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。
8 清洗
每次用完之后，將柱子里的緩沖液置換為去離子水，然后用20%的乙醇封存。
9 在位清洗（CIP）
凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。