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當前位置:
紅榮微再(上海)生物工程技術有限公司>>核酸分析/測序/蛋白組學>>文庫構建/靶向panel>> R500653 R500654 R500655rubicon SMARTer® microRNA-Seq 文庫構建

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rubicon SMARTer® microRNA-Seq 文庫構建

rubicon SMARTer® microRNA-Seq 文庫構建
參考價 9896
訂貨量 1
具體成交價以合同協議為準
  • 型號 R500653 R500654 R500655
  • 品牌 其他品牌
  • 廠商性質 生產商
  • 產品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 上海市

更新時間:2019-04-17 10:05:50瀏覽次數:1761

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產品簡介
產地類別 進口
rubicon SMARTer® microRNA-Seq 文庫構建
實現高準確性、特異性和再現性的small RNAs 和microRNA分析

rubicon SMARTer® microRNA-Seq 文庫構建

microRNA-Seq(for Illumina)

品牌    Code No.     包裝量     價格

Clontech R500653 16 Rxns    9,896 元  

Clontech R500654 48 Rxns    27,036 元   

Clontech R500655 96 Rxns    48,771 元

 歡迎您致電 華雅再生醫學旗艦公司:紅榮微再(上海)生物工程技術有限公司  181 6644 1624。紅榮微再-客服 1022 355 724  

SMARTer® microRNA-Seq Kit

SMARTer® microRNA-Seq Kit:實現高準確性、特異性和再現性的small RNAs 和microRNA分析

· 采用的MAGIC技術減少偏差,獲得準確且重復性好的small RNA和miRNA分析

· 以100 ng-1 μg的總RNA或2-200 ng富集的小RNA樣品起始,高靈敏度的制備文庫

· 簡單的單管操作,6小時內制備高質量的小RNA文庫

 

SMARTer microRNA-Seq Kit專門用于構建高質量microRNA(miRNA)的Illumina測序文庫。使用*的MAGIC技術(Mono-Adapter liGation and Intramolecular Circularization),以100 ng- 1 μg總RNA或2-200 ng富集小RNA(包括miRNA)樣本量起始,減少接頭連接帶來的偏差。這項創新技術使SMARTer microRNA-Seq Kit能夠以高重現性,高準確性和高靈敏度捕獲小RNA和miRNA ,確保研究結果的*性和可靠性。此外,該試劑盒的另一個特點是簡便的單管操作流程,可在不到6小時成功生成文庫,操作方便的同時降低被污染的風險。

 

SMARTer microRNA-Seq試劑盒

甚至可以捕獲microRNA以獲得準確的microRNA表達譜
Mono-adapter連接和分子內環化技術可以大限度地減少偏差

和競爭對手比較:

Illumina,NEB,Bioo和QIAGEN方法有更高的靈敏度和準確度

可靠地捕獲輸入源和數量的小RNA種類可
重復的結果可以更好地反映樣品的真實生物狀態 

介紹:

在細胞調節過程中,小的非編碼RNA(長度在15到200個核苷酸之間)在調節遺傳信息流動中起著關鍵作用(Phillips 2008)。它們能夠調節RNA剪接和蛋白質翻譯,通過改變染色質結構影響DNA復制,以激素樣方式介導細胞間通訊,并參與基因組防御(Bayraktar,Van Roosbroeck和Calin 2017; Phillips 2008; Tao等2017)。雖然存在多種類型的小非編碼RNA,但microRNA的調節作用 - 通過以序列依賴性方式與靶mRNA結合起作用 - 是熟知和研究的。

MicroRNA測序是研究人員檢查microRNA表達模式,表征新型microRNA和揭示疾病相關microRNA的有用工具。由于microRNA在一系列標本(例如尿液,FFPE組織)中異常良好地保存,因此分析它們的表達可以作為強有力的診斷工具(Stuopelyte等人2016; Kakimoto等人2016)。然而,用于測序微小RNA的大多數方法涉及連續的分子間連接事件。這些事件引入了相當大的系統性偏倚,導致許多前瞻性生物標志物的丟失或過度表現,因此庫不是起始樣品的真實反映(Fuchs等,2015; Raabe等,2014)。

我們近開發了SMARTer microRNA-Seq Kit,它使用M ono- A dapter li g ation 和I ntramolecular Circularization(MAGIC)技術可有效捕獲具有極低偏差的microRNA種類(圖1)。通過連接制備文庫,但是,不是經歷兩個連續的分子間連接事件,微小RNA在其3'末端接受單個組合銜接子。該適配器(在反應中剩余的,未連接的銜接子小化之后)允許microRNA通過與底物分子的5'-末端的環化事件側接兩個獨立的銜接子。將側翼適配器的環狀微小RNA逆轉錄,并使用用于Illumina測序平臺的條形碼索引引物對cDNA進行PCR擴增。

 

 

圖1. MAGIC技術原理

 

 

圖2. 使用SMARTer microRNA-Seq kit高準確性高靈敏度分析miRNA

 

(以上比較數據來源于Takara Bio Inc.)

 

取由963種合成miRNA等摩爾混合后制成的miRNA Pool,分別使用本試劑以及其他4家公司的同類產品(接頭連接法)制備文庫,然后進行測序,比較這幾種文庫miRNA的表達量。使用本kit制備的文庫比其他4種基于接頭連接法的同類產品更準確,且獲得的基因檢測數更多。

 

Panel A: microRNA表達水平(Y軸,對數標度),每種miRNA(X軸,按照表達水平排序)。將假想的表達量水平全部設置為1進行均一化,以上下相差2倍作為cutoff值,顯示了cutoff值范圍內的miRNA表達量的比例。

 

Panel B:分析了每百萬不同計數檢測到的microRNAs數量,X軸為不同計數閾值,Y軸為對應檢測到miRNA數量。

 

 

SMARTer方法可在輸入源和數量之間產生高度可重復的結果

為了評估SMARTer microRNA-Seq試劑盒在多種總RNA來源和輸入量上的表現,使用來自已知含有不同microRNA表達水平的四種來源的100 ng或1μg總RNA(RIN> 8)制備文庫(如表I中所述,在2%和13%之間:人腦,人胎盤,人脾和miRQC研究中使用的通用參考RNA樣品(Mestdagh等人,2014)。表I中顯示的測序指標表明輸入源和數量的*結果。

所有文庫都顯示在輸入水平和來源的緊密范圍內(~48-71%)映射到hg38。當microRNA讀數被定位到miRbase并以總讀數的比例表示時,結果顯示每個輸入量的RNA源之間的*映射。此外,SMARTer文庫制備可以捕獲其他小RNA種類(統稱為piRNA,snoRNA和snRNA),并且不會丟失對rRNA的許多讀數。這種趨勢也可以用較低的輸入量(1-10ng總RNA;數據未顯示)看到,盡管這些樣品遭受可能影響測序質量的增加的銜接子 - 二聚體污染。文庫制備顯示在5X或更高讀數下檢測到的相似數量的microRNA,無論microRNA比例如何(數據未顯示),表明有效且較少偏向的microRNA捕獲。

 

 

 

表1.不同組織來源的RNA的分析結果

 

以四種microRNA含量不同的100 ng和1 μg的總RNA起始,分別進行文庫分析。通過起始量多少的比較,結果顯示microRNA reads在total reads的占比結果相差不大。此外,除miRNA之外還可以檢測到其他小RNA(piRNA,snoRNA,snRNA),但是檢測到的rRNA的比例不高。

歡迎您致電 華雅再生醫學旗艦公司:紅榮微再(上海)生物工程技術有限公司  181 6644 1624。紅榮微再-客服 1022 355 724   

結論  

微小RNA是一類小的非編碼RNA,可作為基因表達的關鍵轉錄后調節因子。由于其在維持細胞功能中的關鍵作用,失調的miRNA表達涉及許多疾病狀態,提高了使用microRNA作為生物標志物的可能性(Wang,Chen和Sen 2016)。因此,準確查詢microRNA表達的能力對于當前和未來的科學進步(包括治療和臨床診斷)是重要的。為此,我們開發了一種方法,通過利用分子內環化(MAGIC技術)向microRNA添加適配器,大限度地減少microRNA文庫制備中連接誘導的偏倚。這導致顯著更低的連接偏差并提供樣品中真實microRNA表達的準確概況。

 rubicon SMARTer® microRNA-Seq 文庫構建

 


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