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Reveal^®2.0沙門氏菌檢測系統

不用時將檢測條儲存在15-30^oC，將干粉培養基儲存在室溫下（15-30^oC）

 

主要用途

    Reveal^®沙門氏菌檢測系統可用于快速鑒定食品及，物飼料和環境樣品中沙門氏菌，完成對沙門氏菌的檢測和初步鑒別只需要24小時。

 

測試原理

本系統利用REVIVE培養基，它能夠為沙門氏菌提供易利用的營養成分，以及其它對受脅迫或損傷狀態下的沙門氏菌進行恢復的必要因子。用REVIVE培養后，選擇性富集培養可使沙門氏菌生長到能夠被Reveal檢測條檢出的水平。Reveal檢測詳述如下:

對于一些樣品，初的非選擇性培養可以饒過，直接將樣品引進到RV培養基中。

對于那些非常黏稠，含色素，或者包含水平無法生活細胞的樣品，可選擇的第三種富集方法能夠檢測到其含有的沙門氏菌。在食品工業中，使用M肉湯培養是幾種的確定標準程序中的好選擇。

將少量富集培養物（120μl）放到樣品杯中，將檢測條浸入到樣品并在環境溫度下保持15分鐘。樣品通過毛細管作用滲過含特異性沙門氏菌抗體（與膠體金顆粒相偶聯）的試劑區。如果樣品中存在抗原（即沙門氏菌），它將與膠體記的抗體結合。該抗原-抗體復合物滲過試劑區，經過含有沙門氏菌抗體（分布呈帶狀）的硝化纖維膜。該含金免疫復合物被捕獲并聚集在這個區域，從而顯示一條可見的線。剩余的樣品繼續遷移而進入位于膜末端的廢液貯存處。

試劑區也含有針對廣譜抗原的金復合物（指示劑），無論沙門氏菌存在與否，它都會被樣品溶液釋放。膠體金復合物對照指示劑通過膜遷移到陰性對照捕獲區（含針對廣譜抗原的抗體區），捕獲并集結成一條可見線。無論沙門氏菌抗原存在與否，都會在質控區形成對照線，以檢測過程操作正確無誤。

 

主要使用者

    Reveal 2.0沙門氏菌測試系統旨為熟悉沙門氏菌分離與鑒定中無菌操作技術的人員而設計的。建議不具備微生物基礎知識的使用者參加Neogen公司的技能培訓。

 

提供的材料

      Reveal檢測條

      20個沙門氏菌檢測條

      20個移液管

      20個反應杯

      REVIVE培養基

      20瓶REVIVE培養基

      20個培養袋

      量杯

      二次選擇性培養基

      20裝2倍濃縮的RV培養基（2×RV）

      20個培養袋

量杯

     直接選擇培養基

      20瓶1×RV培養基

      20個培養袋

量杯

 

試劑盒不提供的必需品

天平（小刻度25g）

計時器

樣品杯架

無菌水

能保持36^oC及42^oC的培養箱

 

可選擇的設備

Reveal AccuScanⅢ 讀數儀器

均質器 

 

儲藏

    不用時，檢測條應儲存于15-30℃；干粉培養基儲存在室溫下（15-30℃）。

 

不同物品的檢測

本產品可有效地用于許多物品中沙門氏菌的檢測。還可從Neogen公司獲得，本產品進行沙門氏菌檢測的物品明細表，同時備有對于不同物品檢測時的富集方法。

 

警惕

1 不要使用過期的培養基

2 打開裝檢測條的瓶子前，讓檢測條升至室溫

3 使用水化培養基須在6小時內準備

4 培養時間和溫度尤為重要，否則會導致錯誤結果

5 在培養過程中樣品袋不能扎得過緊，以便于空氣交換；這對沙門氏菌生長及抗原表達至關重要

6 水化REVIVE培養基時無菌水應該升至42^oC，水化RV培養基時無菌水應是36^oC

7 選擇性富集的培養物的檢測應在培養后的6小時內完成

8采用良好微生物實驗室操作規程

 

1 樣品準備及預培養

  樣品富集1—適用于大多數食品和環境樣品

1 將1瓶REVIVE培養基（9705）或者7.2g大瓶裝的REVIVE培養基（9708）倒入培養袋中，加入200ml預熱至42℃的無菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解；

2 將25g樣品（樣品的溫度必須與室溫一致）加到含有REVIVE培養基的培養袋中，抓緊袋子并使樣品混勻，用一邊到另一邊的方式劇烈晃動袋子，使確保混勻；參考辦法：將袋子放到均質器內，用正常速度下混勻30秒鐘。

3 松散地緊閉袋子（見“警惕”第5步），放進合適的架子或支撐物，36±1℃培養4小時

4將1瓶濃縮的2×RV培養基（9715）或者10.6g大瓶裝的RV培養基（9716）倒入培養袋中，加入200ml預熱至36℃的無菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解,在使用前保持在42℃

5將REVIVE培養袋子從36℃的溫箱取出放到合適的架子或支撐物上

6向樣品袋內（共200ml）加入200ml預熱到42℃的預先制備的選擇性RV培養基，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用一邊到另一邊的方式輕輕混勻

7松散地扎上袋子口，并將其放到架子或支持物上，42^oC培養16-24小時

 

樣品富集2—適用與挑選的食品，包括生的碎牛肉，生的碎家禽肉，生海鮮，家禽沖洗水

1將1瓶1×RV培養基（9729）或者5.3g大瓶裝的Rv培養基（9716）倒入培養袋中，加入200ml預熱至42℃的無菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解；

2將25g樣品（樣品的溫度必須與室溫一致）加到含有1×RV培養基的培養袋中，抓緊袋子并使樣品混勻，用一邊到另一邊的方式劇烈晃動袋子，使確保混勻；參考辦法：將袋子放到均質器內，用正常速度下混勻30秒鐘。

3松散地扎上袋子口，并將其放到架子或支持物上，42^oC培養20-24小時

 

樣品富集3—適用與潛在的困難樣品，包括干的寵物食品，高黏性或者高色素原料

1 將1瓶REVIVE培養基（9705）或者7.2g大瓶裝的REVIVE培養基（9708）倒入培養袋中，加入200ml預熱至42℃的無菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解；

2 將25g樣品（樣品的溫度必須與室溫一致）加到含有REVIVE培養基的培養袋中，抓緊袋子并使樣品混勻，用一邊到另一邊的方式劇烈晃動袋子，使確保混勻；參考辦法：將袋子放到均質器內，用正常速度下混勻30秒鐘。

3 松散地緊閉袋子（見“警惕”第5步），放進合適的架子或支撐物，36±1℃培養4小時

4將1瓶濃縮的2×RV培養基（9715）或者10.6g大瓶裝的RV培養基（9716）倒入培養袋中，加入200ml預熱至36℃的無菌水，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用力混勻，直到溶解,在使用前保持在42℃

5將REVIVE培養袋子從36℃的溫箱取出放到合適的架子或支撐物上

6向樣品袋內（共200ml）加入200ml預熱到42℃的預先制備的選擇性RV培養基，抓牢袋子離頂部2-3英寸處并用一邊到另一邊的方式輕輕混勻

7松散地扎上袋子口，并將其放到架子或支持物上，42^oC培養16-24小時

8加入10ml 36℃的無菌水到1瓶M肉湯培養基（9722）中，握緊搖動來溶解該培養基

9移取1ml REVIVE/RV的培養液到溶解的M-肉湯內

10 36^oC培養下6小時

 

檢測條檢測過程

   1. 從培養箱中取出樣品袋，混勻，取200ul或者8滴到樣品杯中

2. 從裝檢測條的瓶中取出沙門氏菌檢測條

3. 將檢測條按箭頭向下端浸入到有樣品的樣品杯中，放置15分鐘

4 . 15分鐘后讀取結果

 

• 結果的解釋

外觀表現                                                  

15分鐘內在質控區和檢測區都出現顯色線，結果為陽性；

15分鐘時只有質控區出現顯色線，結果為陰性；

如果質控區沒有顯色線，則檢測無效，需要用另一個檢測條檢測；

超過20分鐘讀取結果是不正確的；

可選擇的電子解釋

根據Reveal AccuScan儀器說明書的操作，將檢測條放到該儀器上，觀察屏幕提示讀取并記錄結果

說明： 如果沙門氏菌存在，檢測條上的檢測區會形成一條明顯的線，線深淺的程度與沙門氏菌的血清變型或含量有關，如果出現明顯可見的線條，不管深淺如何，樣品都將視為陽性。

從RV培養基中遷移出來任何藍色到檢測條中都不影響結果。

 

• 確認

建議用Reveal富集培養初步鑒定為陽性的樣品應該采用BAM或者BLG中的涂布平板法確認。

說明： 用BAM或MLG方法檢測一個“復制”的“亞樣品”的結果并不一定與Reveal檢測的結果一致！細菌并不是均勻的分布于樣品中（對于固體或干的樣品更是如此），因此，復制的亞樣品可能不含有沙門氏菌。

 

用品的處理

按照當地州或聯邦政府實施的所有相關規定處理（高壓滅菌或漂白粉漂白等方法處理）Reveal檢測裝置，移液管，培養基等。