大鼠封閉蛋白5(CLDN5)檢測試劑盒的對照說明

1.封閉時間改用37度2h，是4度24h

2.洗板改成5次以上

以上為了保證減少非特異性吸附造成的顯色，影響對結果的判斷和分析。

結果顯示：1：10、1：100、1：200、1：400的陰、陽血清均隨抗原呈現剃度變化。

陽性血清呈梯度變化是可以理解的，但陰性血清不該這么明顯，原因有二：a.包被抗原量不足，大鼠封閉蛋白5(CLDN5)檢測試劑盒封閉不夠充分，導致板條仍有未封閉的位點，可以和酶標抗體結合，自然包被抗原量越多，位點越少，則顯色越弱。b.陰性血清稀釋度過低，導致仍存在非特異的結合，在封閉*的情況下，要保證陰性血清OD值低，根據具體情況可以稀釋到1000倍或以上都可以。

抗原空白對照背景低，但一抗空白對照背景高，甚至比陰性血清OD值高。

這點用封閉不*比較好解釋，陰性血清在這里相當于起了一個封閉作用，酶標抗體結合少了，顯色自然低了。

大鼠封閉蛋白5(CLDN5)檢測試劑盒另外1：10稀釋的陰性血清和陽性血清OD值相差較大，這與報道較多的1：100稀釋效果好有些出入，不知是否可以用于以后檢測時的稀釋倍數？？以上原因是否與包被抗原未進行較高提純以及封閉有關？

OD值相差較大，但首先要看陰性對照的本底如何（較空白空如何）？如果本底高，是會對結果造成影響的。這里需要找出稀釋度。

大鼠封閉蛋白5(CLDN5)檢測試劑盒抗原的提純是取決于抗體特異性的，如果所使用的為單抗，對抗原純度要求可以不高，但是如果是多抗，那么抗原不純將容易引起非特異性的顯色。

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