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尿調素-慢性的有效標志之一
尿調素(Uromodulin)是一個由UMOD基因編碼的糖蛋白,是哺乳動物正常人體尿液中含量zui高的蛋白,主要來自哺乳動物腎臟亨氏袢。
尿調素單體的分子量約為85kDa, 它有幾種不同的異構體。尿調素在尿液中以聚集體的形式存在,所以分子量可以達到幾百萬道爾頓。當pH低時,可析出形成凝膠。
針對尿調素分別進行了序列分析、選取Glu28~Glu149進行基因克隆和蛋白表達,獲得尿調素的重組蛋白,。用該蛋白作為免疫原分別免疫小鼠和兔后,獲得了單克隆抗體和多克隆抗體,以及生物素標記的多克隆抗體PAG918Hu71。這些抗體可用于WB、ICC、IHC-P、IHC-F、ELISA等實驗中。
利用已經獲得的抗體,進行抗體配對,選取組裝成試劑盒的抗體組裝成試劑盒。試劑盒可用來檢測不同生物樣本中UMOD的含量。
現在研究表明,尿調素與妊娠、慢性腎臟疾病等都有重要關系,不孕和流產的婦女尿中UrM水平顯著高于正常人。故常見研究UMOD采用的樣本為尿液和精液。尿液和精液的處理辦法如下:
尿液樣本的處理方法:請收集清晨*次尿液(中段尿),或24小時尿液,2000×g離心15分鐘后收集上清,并將標本保存于-20oC,且應避免反復凍融。
精漿:精液標本收集于無菌容器中,室溫或37oC水浴箱中液化。待精液*液化后,將精液 4000 rpm離心10 min分離精漿。
處理好樣本后可進行上樣。以下是采用試劑盒測的的檢測數據,樣本包括尿液樣本和精液樣本。請見數據。
樣本采用的是100倍稀釋,采用雙標曲。
檢測原始數據OD(450nm-630nm)如下:
實驗室的樣本背景不詳,但體現出對于樣本良好的檢出性。同時復孔質檢的差異小,標曲線性高于99%。
實驗結果以及各方數據表明了試劑盒的高質量。而臨床對Uromodulin許多方面的功能有待進一步研究,.研發的蛋白、抗體以及Elisa試劑盒對Uromodulin的研究提供了必要的生物手段。
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