直接 ELISA法

[直接 ELISA法] 實驗步驟 1. 包被抗原1) 用 PBS 或碳酸鹽緩沖液稀釋抗原至終濃度 20 μg/ml。用移液器吸取 50 μl 稀釋抗原到 PVC 酶標板上，按要求往后進行系列稀釋。2) 酶標板上覆蓋封口膜，室溫孵育 2 小時，或者 4 °C 一夜。孵育時間需要優化。3) 倒掉孵育溶液，用 PBS 洗板 2 次，每孔 200 μl。在水池上輕甩倒掉洗液，在紙巾上輕拍酶標板除去殘留液 [ELISA 抗原 緩沖液 抗體]

實驗步驟

1. 包被抗原

1) 用 PBS 或碳酸鹽緩沖液稀釋抗原至終濃度 20 μg/ml。用移液器吸取 50 μl 稀釋抗原到 PVC 酶標板上，按要求往后進行系列稀釋。

2) 酶標板上覆蓋封口膜，室溫孵育 2 小時，或者 4 °C 一夜。孵育時間需要優化。

3) 倒掉孵育溶液，用 PBS 洗板 2 次，每孔 200 μl。在水池上輕甩倒掉洗液，在紙巾上輕拍酶標板除去殘留液體。

2. 封閉

1) 用含 5% 脫脂奶粉或含 5% 血清的 PBS 緩沖液封閉酶標板上剩余的蛋白結合位點，每孔 200 μl。或者用其他封閉劑如 Block ACE、BSA（牛血清蛋白）代替。

2) 封口膜覆蓋酶標板室溫至少孵育 2 小時，或者 4 °C 一夜。

3) PBS 洗板 2 次。

3. 加抗體孵育

1) 加入抗體，每孔 100 μl，稀釋到*濃度（參照廠家推薦），使用前用封閉液現配。

2) 封口膜覆蓋酶標板室溫孵育 2 小時，孵育時間需要進行優化。通常 2 小時孵育即可獲得足夠強的信號，但如果獲得的信號較弱時，可4 °C 孵育一夜獲得較強信號。

3) PBS 洗板 4 次

4. 檢測

1) 用多通道吸液器加入底物，每孔 100 μl（或 50 μl）。

2) 顯示出足夠深的顏色后，加終止液（如有必要），每孔 100 μl。