豬戊型肝炎間接ELISA診斷試劑盒的研制

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)感染引起的一種急性、自限性疾病。病毒通過糞-口途徑進行傳播,其爆發和流行主要分布在發展中國家,常因飲用水被污染而引起,散發病 例呈分布。1997年,*株動物源性HEV—豬HEV的發現,揭開了動物源性HEV研究的新篇章。其后,各發達國家及印度等國陸續都有豬HEV的相 關報道,明確提出HE為一種人畜共患病,已成為各國密切關注的公共衛生問題。 本試驗應用RT-PCR技術從HEV陽性豬糞便中擴增出ORF2的部分基因片斷,大小為681bp,將其克隆于pMD18-T載體經測序分析。將該片段插 入pET-32a表達載體,轉入大腸桿菌BL21,經0.2mM IPTG誘導得到融合表達蛋白,SDS-PAGE分析證明該分子量為45KD,命名為PET32a-p221。Western blot試驗顯示PET32a-p221與HEV陽性血清發生反應,具有良好的抗原性。應用PET32a-p221作為抗原,確定了zui適包被濃度為 6μg/mL,血清zui適稀釋度為1:100,作用時間為60min,酶標抗體zui適稀釋度為1:4000,作用時間為60min,建立了HEV間接 ELISA診斷方法。該方法與豬傳染性胃腸炎病毒、豬圓環病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬偽狂犬病毒、豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒陽性血清不發生交叉反 應,具有良好的特異性。批內重復試驗變異系數小于10%,批間重復試驗變異系數小于15%,說明具有很好的重復性。用該方法檢測青海省人畜血清樣品結果顯 示,HEV感染率有顯著差異(x~2=38.78,P＜0.01),其中以豬感染率zui高為95.96%,其次家犬感染率為30%,在馬和雞中未檢出戊型肝 炎。同一種動物HEV感染率在不同地區差異不顯著(x~2=5.78,P＞0.05)。該方法與萬泰公司雙抗原夾心ELISA診斷試劑在檢測人、馬、雞、 牛、豬戊型肝炎的符合率均為100%,而在家犬和山羊的符合率上存在差異,但不顯著。 本試驗建立的豬戊型肝炎間接ELISA診斷方法通過實驗室和現地應用,表明該方法具有良好的特異性、敏感性,為我國豬戊型肝炎的防治與監測提供了診斷技 術。