懸浮培養細胞傳代步驟

絕大多數有限細胞系、連續細胞系的原代培養都是貼壁依賴的，因此依附于某一表面形成單細胞層。但是還有一些細胞，特別是來源于血液系統或某些特定腫瘤組織的細胞，是不依賴于貼壁的，懸浮生長。

懸浮細胞培養與單層細胞培養相比有很多優點。其中zui大的優勢是，傳代時只需要對細胞進行稀釋即可，由于不存在蛋白水解酶、機械力等造成的創傷，傳代后基本不會影響細胞生長速率。此外，懸浮培養的細胞能充分利用培養空間，而且能夠非常直觀觀察到細胞規模擴大。細胞可以在類似于培養酵母菌或細菌的發酵罐樣的生物反應器內大規模擴增。

根據細胞類型不同，懸浮培養的接種密度通常介于2× 104 cells/ml到5 × 105 cells/ml之間，有些細胞甚至可以達到2 x 106 cells/ml。如果細胞接種密度過低，他們將經歷一個生長停滯期，細胞生長十分緩慢甚至全部死亡。但是如果接種密度過高的話，細胞會很快將培養基內的營養成分耗竭，然后突然死亡。請參照說明書了解推薦接種密度、傳代比例、培養基更換時間表以及推薦使用的培養基等具體信息。

懸浮培養細胞傳代步驟：

1．事先將*培養基自冰箱內拿出，平衡至室溫。

2．使用移液槍吹打重懸培養在靜置培養容器內的細胞，使細胞懸液充分混勻。取適量細胞懸液用血球計數板計算細胞密度。

3. 根據說明書推薦的zui低接種密度及步驟2算出的細胞密度，計算需要接種到新培養容器內的細胞懸液體積以及需要加入的新鮮培養基的量。

4. 在新的培養容器內加入步驟3計算出的所需添加的新鮮培養基及細胞懸液。如有必要，可在培養容器內充滿無菌過濾的CO2，封好培養容器并置于合適的溫度下孵育培養。

5. 通常情況下，換液時不需要每次都*更換成新的培養基，除非細胞密度非常高或者是培養基的pH偏酸性（培養基顏色偏黃）。如需*更換培養液，將細胞懸液在125g離心力下離心10 min，吸棄舊培養基，然后使用新鮮培養基重懸細胞。