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上海申知心生物科技有限公司
主營產品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2025-04-29 09:44:53瀏覽次數：1737
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取材與預處理
組織獲取：需無菌操作快速獲取新鮮組織（如肝臟、心肌等），避免機械損傷和干燥。例如，肝細胞分離需麻醉大鼠并進行肝臟灌流；骨髓細胞需剪開小鼠下肢并沖洗骨髓
組織處理：剪碎組織至1-3 mm3小塊，便于后續消化。
細胞分散
酶消化法（常用）：使用胰蛋白酶、膠原酶等消化細胞外基質，釋放單個細胞。不同組織需調整酶濃度和作用時間（如小鼠腎臟需嚴格控制消化時間）。
機械法：通過剪切、研磨或擠壓分散組織，適用于堅硬組織（如心肌）或纖維少的組織（如腦組織）。
懸浮離心法：低速離心分離血液或腹水中的細胞，利用密度差異分層收集。
純化與培養
梯度離心/差異貼壁：去除雜質細胞（如紅細胞）或利用貼壁速度差異純化目標細胞（如心肌細胞）。
培養條件：使用含生長因子（如EGF、bFGF）的培養基，并根據細胞類型調整血清濃度（如軟骨細胞需低濃度胎牛血清）。
| 方法 | 操作要點 | 適用組織 | 優缺點 | 來源 |
|---|---|---|---|---|
| 酶消化法 | 胰蛋白酶/膠原酶消化，控制時間和濃度 | 實體組織（皮膚、腫瘤等） | 高效但需優化條件，避免過度損傷細胞 | |
| 機械分散法 | 剪切、研磨或擠壓（如注射器針頭壓出細胞） | 堅硬組織（骨骼肌）或腦組織 | 快速但細胞損傷大，純度較低 | |
| 懸浮離心法 | 低速離心（1000 rpm，10分鐘） | 血液、羊水等懸液 | 操作簡便，但僅適用于懸浮細胞 | |
| 試劑盒法 | 正向選擇（抗體捕獲）或負向選擇（去除雜質） | 復雜組織（如PBMC中分離T細胞） | 高純度但成本較高 |
無菌操作：全程在超凈臺中進行，避免污染。
酶活性控制：預實驗確定最佳酶濃度和作用時間，消化后需用含血清培養基終止反應。
細胞活力檢測：使用臺盼藍染色法評估細胞存活率（如原代肝細胞需活力＞85%）
。
標準化培養：不同實驗室條件差異可能影響結果，需統一培養基和傳代流程。
快速消化法（RD法） ：將軟骨細胞分離時間從12-16小時縮短至3小時，提高存活率和增殖活性。
改良培養基：添加維生素C或PLGA納米顆粒，減少血清依賴并維持細胞功能。
3D培養技術：結合酶消化法分離細胞后，模擬體內環境進行三維培養，提升研究真實性。
