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主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
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2017-8-10 閱讀(2896)
1.選擇好的RNA分離方法
現(xiàn)有眾多的RNA分離方法也許令人難以取舍。目前簡(jiǎn)單也是安全的方法是柱式分離，如RNApure 因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單，時(shí)間短，純度高而受到大家的喜愛(ài)，RNApure不需要DNA酶消化DNA，節(jié)省了時(shí)間，避免RNA的降解，從而提高了產(chǎn)量；相對(duì)非柱式分離（如TRIZOL），去除蛋白及其他雜質(zhì)干凈，提高了純度，對(duì)于細(xì)胞、組織、一般植物均非常適合。植物RNA的提取比較難抉擇，植物RNA提取受酚、多糖、蛋白雜質(zhì)、次生代謝物含量的影響，一般用TRIZOL提取純度不高，而且很多植物用TRIZOL提取不出來(lái)。這時(shí)候可以選擇多糖多酚植物總RNA提取試劑盒（水仙、辣椒、胡蘿卜、玉米、百合、小麥、西紅柿、花菜、油菜等）和通用植物RNA提取試劑盒（適合絕大多數(shù)植物提取，包括：蘋(píng)果、葡萄、草莓、香蕉、龍眼、荔枝、草坪植物、松樹(shù)、杉樹(shù)、白樺、紫松果、彩葉草、一品紅、夾竹桃、垂葉榕、紫羅蘭、月季、天竺藍(lán)、牽牛花等）；非常值得一提的是血液（包括血清、血漿、腦脊液、其他液體）RNA的提取用TRIZOL和紅細(xì)胞裂解的方法效果都不好，紅細(xì)胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分，這個(gè)過(guò)程RNA很容易降解，推薦使用TRIpure LS 或者血液總RNA提取試劑盒。
2.消除環(huán)境RNase的污染
為了得到完整的、高品質(zhì)RNA，在整個(gè)RNA制備過(guò)程中，當(dāng)RNA離開(kāi)強(qiáng)蛋白變性劑（如離液裂解液或酚）的保護(hù)時(shí)，避免引入新的RNase污染就非常關(guān)鍵。由于RNase存在，所以與純化的RNA接觸的每一樣?xùn)|西都是無(wú)RNase污染的。的表面，包括移液器、工作臺(tái)、玻璃器皿和制膠設(shè)備，都用表面去污凈化溶液如RNase噴霧清除劑 來(lái)處理過(guò)，去除各種溶液或者反應(yīng)緩沖液中可能存在的RNase污染，可以用RNAsafe。一直使用無(wú)RNase的槍頭、試管和阿溶液，手套也應(yīng)經(jīng)常更換。
3.提取好的RNA如何儲(chǔ)存
如果只是短期儲(chǔ)存，重懸的RNA應(yīng)放置于-20°C；如果是長(zhǎng)期儲(chǔ)存的話，就應(yīng)該放置于-80°C。盡管重懸于水或緩沖液中的RNA也可以儲(chǔ)存在-80°C，但保存RNAlong中的RNA沉淀則更加穩(wěn)定，可以長(zhǎng)期保存。我們推薦將RNA溶液分裝在幾支管中。這會(huì)避免反復(fù)凍融損傷RNA，并預(yù)防偶然的RNase污染。
4.使用正確的細(xì)胞或組織儲(chǔ)存條件
在樣品用液氮瞬間凍結(jié)之后，應(yīng)該儲(chǔ)存在-80°C，千萬(wàn)不能解凍。即使是置于含有胍鹽的裂解液中作勻漿前的短暫解凍，也會(huì)導(dǎo)致RNA的降解和損失。瞬間凍結(jié)的組織應(yīng)該先在超低溫條件下先研磨成粉，然后置于裂解液中進(jìn)行勻漿。
