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商品屬性：

背景：

RANKL是腫瘤壞死因子配體超家族成員11，也稱為核因子kappa-B受體激活因子的配體，骨保護素配體，TNFSF11，RANKL，TRANCE，OPGL和CD254, 在多種細胞中表達，如成骨細胞，成纖維細胞，活化的T淋巴細胞，以及骨髓間質細胞。RANKL可以與誘騙受體OPG反應，并參與許多基礎生物學過程，例如充當T細胞與樹突狀細胞之間相互作用的調節(jié)因子，調節(jié)T- 細胞依賴的免疫效應，并可以增強高鈣血癥的骨吸收。重要的是，RANKL可以增強樹突狀細胞刺激初始T細胞的增殖能力。

標記：

1.將細胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養(yǎng)基。

2.提前將2×EdU標記培養(yǎng)基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養(yǎng)基與等體積細胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2 h，棄培養(yǎng)基。

【注】：①培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)。②大多數(shù)腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。

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