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上海一研生物科技有限公司

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底物消減文庫和肽段連接酶的底物特異性

閱讀:1268      發布時間:2015-6-25
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底物消減文庫
這是一種改良的底物噬菌體技術,用于區別兩種不同蛋白酶的底物特異性。首先的幾輪篩選使用*種蛋白酶篩選底物文庫,將陽性底物分離出來。之后,又用第二個蛋白酶底物對此陽性底物進行篩選,分離得到非底物序列。結果,得到的序列能夠被*個酶水解,但是不能夠被第二個蛋白酶水解。這種方法被用于區別纖溶酶原激活物t-PA和u—pA的特異性。盡管兩種蛋白酶都可以切割在P2和P1位點上的同一種GR序列,但是通過這種方法發現u-PA優先切割P3位點的絲氨酸,而t-PA更偏向于切割體積較大的氨基酸,如酪氨酸和精氨酸。

肽段連接酶的底物特異性
多種底物噬菌體展示技術被用于闡明一個工程連接酶的底物特異性。一種其活性位點221位絲氨酸突變成半胱氨酸、225位脯氨酸突變成丙氨酸的枯草桿菌蛋白酶變異體,被發現可以將脂化的肽段連接到其他肽段或蛋白的N末端。通過將噬菌體展示的hGH前三個密碼子隨機化制備底物噬菌體文庫,讓它與枯草桿菌蛋白酶變異體在生物素連接的肽脂(亞氨基生物素—KGAAPF-甘油—F—酰氨)存在的情況下一起反應,用抗生物素蛋白的瓊脂糖珠捕獲而分離連接后的底物噬菌體。這樣,文庫中那些含有連接反應的良好親核試劑的文庫多肽就被選擇性地富集。以此方法得到的結果與使用合成底物得到的結果符合得很好,尤其是在P1,位點上。

英文名稱 Homo sapiens (Human) 羧酸酯酶3(CES3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 羧酸酯酶2(CES2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Rattus norvegicus (Rat) 羧酸酯酶1(CES1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 羧酸酯酶1(CES1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 General 羧甲基賴氨酸(CML)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 羧基端結合蛋白2(CTBP2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
蛋白英文名稱 Homo sapiens (Human) 髓樣前體細胞抑制因子2(MPIF2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Mus musculus (Mouse) 髓樣前體細胞抑制因子2(MPIF2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 髓樣前體細胞抑制因子1(MPIF1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 規格: 48T/96T

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