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詳細介紹
CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒
CYTO-ID® Autophagy Detection Kit使用新型染料檢測自噬小泡和監控活細胞自噬流，選擇性標記積累的自噬小泡。染料已通過優化，不染溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現出明亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細胞轉染，可以在活細胞中監控細胞自噬的快速定量方法。 |
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◆特點
● 無需轉染，定量監測活細胞中的自噬情況
● 免去LC3-GFP轉染所需的時間和精力以及轉染效率的驗證
● 含有特殊基團的染料選擇性地染色自噬小泡
● 試劑盒中包含已知活性的自噬抑制劑與激活劑
● 快速量化原生異質性細胞群中的自噬
● 選擇性地染色，可檢測和區分自噬流（autophagic flux）和自噬溶酶體的積累
● 不染溶酶體，減少其他染料的背景干擾
● 便于高通量篩選自噬激活劑和抑制劑
◆原理
該產品所用探針是陽離子兩親性示蹤劑（CAT）染料，以類似誘導磷脂藥物的方式迅速進入到細胞中。染料的功能基團能夠選擇性標記與自噬通路相關的小泡，而不會在溶酶體中聚集。
胞內物質被擴大的膜囊包裹，吞噬泡形成雙層膜囊泡，成為自噬體。自噬體外膜隨后與溶酶體融合，和內部物質被自噬性溶酶體降解。自噬的各種調節因子也被描繪于圖中。 |
自噬原理圖 |
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◆應用
省時省力，無需轉染即可自快速全面的標記自噬小泡 為了演示CYTO-ID® Green detection reagent的優勢，先用RFP-LC3表達載體轉染HeLa細胞， 10μM的Tamoxifen處理過夜，然后用CYTO-ID® 綠色檢測試劑染色。LC3轉染法需要過夜，而CYTO-ID® 綠色檢測試劑的方法在15-30分鐘內標記細胞達100％。圖A：綠信號顯示自噬小泡的CYTO-ID?® 綠染;圖B：成功轉染細胞的RFP-LC3表達（紅色）;圖C：自噬體的特異性標記LC3，與CYTO-ID® 綠色染料標記的小泡共定位的復合圖像。 |
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無轉染的自噬檢測 Hela細胞進行饑餓與恢復，然后使用CYTO-ID® Green detection reagent標記。染料可以明確檢測和量化自噬及與自噬誘導相關的自噬小泡前體。圖1A：穩定表達GFP-LC3的CHO細胞，結果顯示對照組與饑餓的細胞群的相對較差的基線分離，自噬難以量化。圖1B：CYTO-ID® Autophagy Detection Kit特異性標記LC3蛋白依賴的自噬小泡，免去轉染操作。 |
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自噬積累和自噬流的可視化 可用熒光顯微鏡觀察CYTO-ID® 自噬綠色染料檢測的自噬液泡積累和自噬流。Hela細胞用以下試劑進行模擬誘導，0.2% DMSO（A）和100μM Clonidine hydrochloride（B）進行誘導，5μM Loperamide hydrochloride和1 μM PP242 hydrate（D）在37°C誘導12小時。處理后，細胞在37℃下用CYTO-ID® Green Detection reagent孵育10分鐘，再用分析緩沖液清洗。細胞核被Hoechst 33342染料復染為藍色。 |
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避免非特異性溶酶體染色的背景干擾 相比其他MDC染色溶酶體檢測，CYTO-ID® 綠色染料無溶酶體染色背景，CYTO-ID® Autophagy kit無需紫外活細胞分析，在顯微鏡共標記應用中，與Hoechst染料兼容。 |
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使用流式細胞儀通過CYTO-ID® Autophagy Detection Kit分析自噬 對照組（紅線峰值）無誘導，10 uM Tamoxifen (ALX-550-095)處理Jurkat細胞（白血病T細胞）（藍線峰值）。處理18小時后，細胞結合CYTO-ID® 綠色檢測試劑，然后不經過流式細胞儀清洗，進行分析。結果通過直方圖呈現。對照組細胞被染色，但熒光亮度低。實驗組中，CYTO-ID® 綠色熒光信號增加約2倍，表明Tamoxifen處理能引起Jurkat細胞中自噬的增加。 |
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使用mTOR激酶抑制劑Rapamycin處理HepG2細胞孵育過夜，結果顯示CYTO-ID® 染色信號升高。 |
CYTO-ID® 綠色染料大多與RFP-LC3蛋白共定位。0.1μM Rapamycin（典型自噬誘導劑）處理過夜，轉染Hela細胞表達RFP-LC3。A: CYTO-ID® Green染色； B: RFP-LC3； C: 合成圖像。 |
◆產品列表
| 產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
| ENZ-51031-K200 | CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒 | 200 tests |
| ENZ-51031-0050 | CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒 | 50 tests |
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◆相關產品
產品編號 | 產品名稱 | 規格 | 備注 | 應用 |
ENZ-51002-25 | 細胞凋亡/壞死檢測試劑盒 | 25 assays | 多重檢測，區分正常、 早期凋亡、晚期凋亡和壞死細胞，與GFP和其他綠色熒光探針兼容。 | FC，熒光顯微鏡，熒光檢測 |
ENZ-51002-100 | 100 assays | |||
ENZ-51021-K200 | 細胞核綠色染色體皺縮檢測試劑盒
| 1 Kit | 高滲透性的綠色熒光染色增強了細胞凋亡誘導染色質固縮。
| FC，熒光顯微鏡，熒光檢測 |
ENZ-52406 | DNA染色試劑盒（紅色熒光） | 200 µl | 細胞可滲透的DNA染色應用廣泛。 | ≥93％（HPLC），FC，熒光檢測 |
ENZ-CHM103-0200 | Nuclear ID® 藍色DNA染色（GFP細胞系） | 200 µL | 細胞可滲透的DNA染色應用廣泛。 | ≥93％（HPLC），FC，熒光檢測 |
ENZ-51015-KP002 | 溶酶體細胞毒理檢測試劑盒（紅色熒光）（綠色細胞系） | 1 Kit | 快速，定量和HTS-兼容的檢測活細胞毒性試劑。 | 熒光顯微鏡，熒光檢測 |
ENZ-51035-0025 | 蛋白內穩態® 聚集體 檢測 試劑盒 | 25 tests | Robust、定量的聚集小體用于神經退行性疾病，肝病和毒理學研究 | FC，熒光顯微鏡，熒光檢測 |
ENZ-51035-K100 | 100 tests |
CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒