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人S100B蛋白(S-100B)酶聯免疫分析
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貨物所在地:上海上海

地: 中國/美國/德國

更新時間:2025-03-24 14:06:14

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人S100B蛋白(S-100B)酶聯免疫分析用于人血清,血漿及相關液體樣本中人S100B蛋白(S-100B)含量。價格公道,現貨供應。

人S100B蛋白(S-100B)酶聯免疫分析

                                                        HY-1017 EIA KIT

試劑盒使用說明書                            

本試劑盒僅供研究使用

產品編號:E0567h

預期應用

ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相關液體中S100B蛋白(S-100B)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中S-100B水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入S-100B抗原、生物素化的抗人S-100B抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S-100B呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制

1.    酶聯板:一塊(96孔)

2.    標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為5,000 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋5,000 pg/ml,2,500 pg/ml,1,250 pg/ml,625 pg/ml,312 pg/ml,156 pg/ml,78 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。

如配制2,500 pg/ml標準品:取0.5ml 5,000 pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3.    樣品稀釋液:1×20ml/瓶。

4.    檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。

5.    檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。

6.    檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100ul),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。

7.    檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。

8.    底物溶液:1×10ml/瓶。

9.    濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10.   終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

人S100B蛋白(S-100B)酶聯免疫分析標本的采集及保存

1.  細胞培養物上清:請離心后收集上清,并將標本保存于-20℃,且應避免反復凍融。

2.  血清:標本請于室溫放置2小時或4℃后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

3.  血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

 

注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

 

 

人S100B蛋白(S-100B)酶聯免疫分析操作步驟

實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1.    加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100ul,余孔分別加標準品或待測樣品100ul,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.    棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul(取1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。

3.    溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.    每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100ul,37℃,60分鐘。

5.    溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.    依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.    依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.    用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

人S100B蛋白(S-100B)酶聯免疫分析注:

1.    每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

2.    為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。

3.    未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

4.    建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。

洗板方法

手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水

紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘,根據需

要,重復此過程數次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

特異性

    本試劑盒可同時檢測重組或天然的人S-100B,且與其它相關蛋白無交叉反應。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

1. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。

2. 一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

3. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。

4. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數。

5. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。

6. 底物請避光保存。

檢測范圍:

78 pg/ml - 5,000 pg/ml

說明

1.    試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時,僅適用于部分試劑);2-8℃(頻繁使用時)。

2.    有效期:6個月

3.    濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。

4.    剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正常現象,不會對實驗結果造成任何影響。

5.    中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準。xy-E10510 【中文名稱】:人抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human anti- proliferating cell nuclear antigen antibody (PCNA) ELISA kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10511 【中文名稱】:人抗IgE受體抗體ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human anti- IgE receptor antibody ELISA kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10512 【中文名稱】:人抗IVIgG抗體ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human anti IVIgG antibody ELISA kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10513 【中文名稱】:人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human anti- myocardial antibodies (AMA) ELISA kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10514 【中文名稱】:人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Anti- Human thyroid microsomal antibody (ATMA / TMAB) ELISA Kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10515 【中文名稱】:人抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human anti- thyroglobulin antibody (ATGA / TGAB) ELISA kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10516 【中文名稱】:人谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human glutamic acid decarboxylase autoantibodies (GAD-Ab) ELISA kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10517 【中文名稱】:人抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human anti -plaet antibodies IgG / M / A (PA-IgG/M/A) ELISA Kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10518 【中文名稱】:人抗淋巴細胞球蛋白(ALG)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human anti- lymphocyte globulin (ALG) ELISA kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10519 【中文名稱】:人抗胰蛋白酶(AT)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human antitrypsin (AT) ELISA Kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10520 【中文名稱】:人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human anti- ribosomal P protein antibody (ARPA / Rib-P) ELISA Kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10521 【中文名稱】:人抗骨骼肌抗體(ASA)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Anti- Human skeletal muscle antibody (ASA) ELISA Kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10522 【中文名稱】:人甲狀腺抗體(TAb)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Thyroid antibodies (TAb) ELISA kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10523 【中文名稱】:人胰島細胞抗體(ICA)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human islet cell antibodies (ICA) ELISA Kit 【靈敏度】:9.375pg/mL
xy-E10524 【中文名稱】:人抗唾液腺導管組織抗體(SDA)ELISA試劑盒 【英文名稱】:Human anti- salivary duct tissue antibodies (SDA) ELISA kit 【靈敏度】:9.375pg/mL

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