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大鼠凝血酶原片段1+2（PF1+2）­ELISA 試劑盒

本試劑僅供研究使用  標本：血清或血漿

試驗原理：

PF1+2試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知PF1+2濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將PF1+2和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中PF1+2的活性濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制

自備材料

1．  蒸餾水。

2．  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．  振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1．  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2．  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

大鼠凝血酶原片段1+2（PF1+2）­ELISA 試劑盒操作注意事項

1．  試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2．  實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

3．  不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4．  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6．  洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7．  底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8．  加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9．  按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、  血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、  血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、  細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、  保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

大鼠凝血酶原片段1+2（PF1+2）­ELISA 試劑盒試劑的準備

1．  標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2．  洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

大鼠凝血酶原片段1+2（PF1+2）­ELISA 試劑盒操作步驟

1．  使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2．  根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3．  加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4．  甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5．  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．  甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7．  每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8．  取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9．  在450nm波長處測定各孔的OD值。

性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

4.局限性：6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到精確的結果。

結 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的PF1+2標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的PF1+2含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-8.0nmol/L

4、敏感度：   0.01nmol/LXYD978Mu 【中文名稱】：小鼠腎上腺素能受體β2(ADRβ2)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Adrenergic Receptor Beta 2 (ADRb2)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYE839Mu 【中文名稱】：小鼠醛脫氫酶9家族成員A1(ALDH9A1)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Aldehyde Dehydrogenase 9 Family, Member A1 (ALDH9A1)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYC903Mu 【中文名稱】：小鼠碘甲腺原氨酸脫碘酶Ⅱ(DIO2)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Deiodinase, Iodothyronine, Type II (DIO2)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYD979Mu 【中文名稱】：小鼠腎上腺素能受體β3(ADRβ3)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Adrenergic Receptor Beta 3 (ADRb3)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYK305Mu 【中文名稱】：小鼠RAS癌基因家族成員RAB5A(RAB5A)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for RAB5A, Member RAS Oncogene Family (RAB5A)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYB109Mu 【中文名稱】：小鼠肌細胞生成素(MYOG)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Myogenin (MYOG)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYF541Mu 【中文名稱】：小鼠白細胞衍生趨化因子2(LECT2)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Leukocyte Cell Derived Chemotaxin 2 (LECT2)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYA659Mu 【中文名稱】：小鼠谷胱甘肽S轉移酶α4(GSTα4)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Glutathione S Transferase Alpha 4 (GSTa4)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYH775Mu 【中文名稱】：小鼠中間α-球蛋白抑制因子H5(ITIH5)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Inter Alpha-Globulin Inhibitor H5 (ITIH5)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYM216Mu 【中文名稱】：小鼠剪接因子3B亞基3(SF3B3)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Splicing Factor 3B Subunit 3 (SF3B3)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYP553Mu 【中文名稱】：小鼠無翅型MMTV整合位點家族成員10B(WNT10B)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 10B (WNT10B)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYB262Mu 【中文名稱】：小鼠整合素β3(ITGβ3)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Integrin Beta 3 (ITGb3)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYJ271Mu 【中文名稱】：小鼠二氫乳清酸脫氫酶(DHODH)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Dihydroorotate Dehydrogenase (DHODH)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYB308Mu 【中文名稱】：小鼠補體成分5a受體1(C5aR1)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Complement Component 5a Receptor 1 (C5aR1)  【靈敏度】：9.375pg/mL
XYD626Mu 【中文名稱】：小鼠ATP結合盒轉運蛋白C6(ABCC6)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter C6 (ABCC6)  【靈敏度】：9.375pg/mL