U251-GFP（人膠質瘤細胞）

細胞操作詳細步驟

                           --懸浮細胞

1.細胞復蘇

1.1準備一個T25的細胞培養瓶并做好標記，預熱好的細胞培養基，一支15ml離心管，離心管中加入4-5ml細胞培養基。

1.2取出細胞凍存管，在37度水浴中快速解凍，將管子擦干消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.3將細胞懸液轉移到加有培養基的離心管中，1000轉離心5分鐘。

1.4倒掉上清，加入培養基輕輕重懸細胞亦可先將細胞團彈散后加入培養基混勻。

1.5將重懸好的細胞轉移到T25細胞培養瓶，補充培養基到5ml左右，十字搖晃，將細胞鋪勻后放入培養箱培養。

2.細胞傳代

第一種方法：

2.1細胞密度達到2×10⁶細胞/ml時，1000轉離心5分鐘收集細胞，棄上清，加入新鮮培養基，使細胞密度在1-3×10⁵細胞/ml.

第二種方法：

2.2細胞密度達到2×10⁶細胞/ml時，將培養瓶中的細胞懸液分裝到新的培養瓶，并補充新鮮培養基，使細胞密度在1-3×10⁵細胞/ml.

3.細胞凍存

將培養瓶中的細胞懸液轉移到離心管中，1000轉離心5分鐘收集細胞，棄上清，加入凍存液，重懸細胞，并分裝到凍存管，凍存密度1-2×10⁶細胞/ml。將凍存管放入程序降溫盒，并放到-80℃冰箱，過夜后將凍存管轉移到液氮保存。

4.注意事項

4.1建議收到細胞后先用我們配套的培養基和血清。收到活細胞的客戶培養瓶中的培養基可回收使用，保存在4度可使用一周。

4.2不同實驗室操作上會有些許差異，為了避免細胞不適應，請先按照說明書推薦的方法和操作步驟培養，待細胞凍存后可根據自己的習慣操作看細胞是否能夠適應。

4.3建議收到細胞后，前幾代及時凍存一些細胞，并最好是可以多凍存幾個批次。

僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產品僅供科研使用，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個人提供產品和服務。