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供貨周期 | 一周 | 規格 | 50T |
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貨號 | XY-0677 | 應用領域 | 醫療衛生,環保,化工,生物產業,農林牧漁 |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 |
新加坡石斑魚虹彩病毒PCR試劑盒
Singapore Grouper Iridovirus(SGIV)
產品及特點
新加坡石斑魚虹彩病毒(Singapore Grouper Iridovirus,SGIV)是一種 DNA 病毒,感染后主要是會造成造血織組壞死,傳染方式主要是以水平感染為 主,該病的外觀臨床癥狀一般包括:體表無明顯損傷,嗜睡,游泳異常;貧血 癥狀明顯,血液稀薄、色淡,凝固性差,鰓外觀呈暗灰色;腎臟失血,呈灰白 色等。但病魚的臨床癥狀也存在一定的差異,該病毒的感染對養魚業造成嚴重 損害,因此新加坡石斑魚虹彩病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重 要作用。本產品就是基于 PCR 技術的快速診斷產品,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物經過精心優化,專一性強,只擴增新加坡石斑魚虹彩病毒,與其他病 毒沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
新加坡石斑魚虹彩病毒PCR試劑盒規格及成分
編號 | 成分 | 規格 |
試劑一 | PCR MagicMix 3.0 | 1 mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 超純水 | 1 mL(藍色) |
試劑三 | 新加坡石斑魚虹彩病毒 PCR 引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑四 | 新加坡石斑魚虹彩病毒 PCR 陽性對照(1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL(黃蓋)
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試劑五 | 天凈沙核酸釋放劑試用裝 | 20 次(1 mL,綠蓋) |
試劑六 | 使用手冊 | 1 份 |
運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,不要污染其 他試劑。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、樣品 DNA 的制備
1. 如果有 N 個樣品,必須設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽 性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)。可以用 10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此 作為 PC。另外用水作為 NC。
2. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。
二、設置 PCR 反應(40μL 體系)
3. 對 N+2 個樣品,在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照,故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分:
成分 | N+2個 樣品管 | PCR陰性對照 | PCR陽性對照 |
PCR MagicMix 3.0 | 各20 μL | 20 μL | 20 μL |
新加坡石斑魚虹彩病毒 PCR 引物混合液 | 各2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 個樣品 DNA 模板 | 各18 μL | - | - |
PCR 陰性對照(水) | - | 18 μL | - |
PCR 陽性對照(新加坡石 斑魚虹彩病毒 PCR 陽 性 對 照 的 10000 倍稀釋液) | - | - | 18 μL |
4. 按下表設置 PCR 反應:
過程 | 溫度 | 時間 |
預變性 | 95℃ | 5 min |
PCR反應 (35個循環) | 95℃ | 15 sec |
55℃ | 15 sec | |
72℃ | 10 sec | |
后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、電泳檢測
5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在 擴增結束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現,陰性對照必須無任何擴增,否則實 驗無效。對沒有擴增產物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
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