基孔肯尼雅病毒RT-PCR試劑盒

Chikungunya Virus(CHIKV)

產品及特點

基孔肯尼雅病毒(Chikungunya Virus，CHIKV)是一種 RNA 病毒，會引起 基孔肯雅病，發熱病人常突然起病，寒戰、發熱，體溫可達 39℃，伴有頭痛、 惡心、嘔吐、食欲減退，淋巴結腫大。一般發熱 1~7 天即可退熱，約 3 天后再 次出現較輕微發熱，持續 3~5 天恢復正常，有些患者可有結膜充血和輕度結膜炎 表現，關節疼痛與發熱同時，患者全身的多個關節和脊椎出現十分劇烈的疼痛， 且病情發展迅速，往往在數分鐘或數小時內關節功能喪失，不能活動，因此靈敏 快捷的診斷產品具有重要的意義。本產品根據 PCR 原理開發，可用于科研領域 快速檢測基孔肯尼雅病毒。它具有下列特點：

1. 一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據基孔肯尼雅病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間 轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。

基孔肯尼雅病毒RT-PCR試劑盒規格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。 

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照；用水作為制備的陰性對照。 制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設置 RT-PCR 反應（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應參數為:

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物， 則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、 陽性對照有 122bp 預期的擴增產物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結果， 如果有擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。