F-*0快速轉化感受態細胞

產品規格

F-*0：                                                  100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (Str^R) endA1 nupG 

F-*0快速轉化感受態細胞產品說明

*0菌株來源于MC1061，是目前實驗室常用的感受態細胞之一，基因型與DH10B高度類似 (DH10B為galE15型，而*0為galU型)。*0生長速度快，37℃，10小時可見克隆。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。可用于構建克隆，藍白斑篩選等實驗。

F-*0感受態細胞經特殊工藝制作，無需42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min內完成轉化、涂板操作，pUC19質粒檢測轉化效率可達1~5×10⁸ cfu/μg DNA。

快速轉化操作方法 (10min)

1. 提前15分鐘將用到的篩選培養基平板拿到37℃預熱

2. F-*0感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。

3. 用200μl槍將感受態細胞-DNA混合物轉移到已經37℃預熱的2YT或LB培養基上。

4. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13 h。

快速熱激轉化操作方法 

(25min,可提高轉化效率)

1. F- *0感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質粒或連接產物)并用手打EP管底輕輕混勻,，冰中靜置5分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘 (晃動會降低轉化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB，37℃，200 rpm 復蘇10分鐘，涂板 (均勻，表面無水漬)。

3. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15h。

注意事項

1. F-*0快速轉化感受態細胞也可進行熱激操作，對于>7 kb質粒的構建，為了提高轉化效率可按以下步驟操作：F-*0感受態細胞從-80℃拿出，插入冰中，5分鐘后，加入目的DNA并用手打EP管底輕輕混勻，冰中靜置20分鐘。42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中靜置2分鐘。加入700 μl LB，37℃，200 rpm復蘇30分鐘，涂板。

2. 感受態細胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率，混入目的DNA時應輕柔操作。

3. F- *0快速轉化感受態細胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，轉化效率下降(因無孵育步驟，卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質粒的轉化效率，可按熱激轉化操作，增加孵育步驟。