SURE Chemically Competent Cell

產品規格

SURE：                                                          100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                      10μl

保存條件(保質期)：                              -80℃（6個月） 

基因型

E. coli B e14^-(mcrA^-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kan^r) uvrC [F´ proAB lacI^qZΔM15 Tn10 (Tet^R)]

SURE Chemically Competent Cell產品說明

真核生物DNA存在較多“十字型”、“Z字型”等二級或三級結構，這種DNA結構在利用傳統大腸桿菌進行克隆時易被大腸桿菌體內的重組酶系統或其他防御系統識別并對其進行重組，刪除等破壞，導致很難對這類DNA進行正確的克隆操作。SURE菌株可以解決這些問題：此菌株體內重組酶系統整條通路被破壞，并且 (McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-)這些限制性突變的存在賦予此菌株無法對外源DNA進行標記、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同時具有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recB recJ)突變，增強了外源DNA的穩定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以進行藍白斑篩選；Kan^r，Tet^r賦予菌株卡那霉素和四環素抗性。SURE感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率達5×10⁸ cfu/μg DNA。

常規操作方法

1. SURE感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質粒或連接產物) 并用手打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項

1. 感受態細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。

4. 此菌株具有卡那霉素，四環素抗性，擁有這兩種抗性的質粒無法使用；對<40 µg/ml氯霉素有抗性，但對100 µg/ml氯霉素敏感。使用其他抗生素參考濃度：氨芐青霉素 (終濃度: 100 µg/ml），氯霉素 (終濃度: 100 µg/ml)。

5.SURE感受態細胞采用常規轉化方法，轉化效率可達5×10⁸ cfu/μg DNA。如果有更高要求，可嘗試Stratagene公司推薦的標準protocol。