DH5α λpir Chemically Competent Cell 

產品規格

DH5α λpir：                                              100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

 DH5α λpir Chemically Competent Cell產品說明

DH5α λpir菌株來源于DH5α，在DH5α大腸桿菌基因組中引入LAMpir，即為DH5α λpir，該菌株可以表達 PIR蛋白，使得含有R6Kg ori復制子的質粒可以在其中正常復制。 DH5α λpir菌株缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒DNA的產量和質量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選；但DH5α λpir菌株生長速度較慢，在平板培養或液體搖菌時應延長生長時間。開發的DH5α λpir感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>1×10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1. DH5α λpir感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇70分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱至少18小時。

注意事項

1. 感受態細胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. DH5α λpir菌株生長緩慢，在平板上培養或液體搖菌時應延長菌體生長時間（37℃，18小時以上）。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。