Rosetta(DE3) Chemically Competent Cell 

產品規格

Rosetta(DE3)：                                           100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質期)：                             -80℃（6個月） 

基因型

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm(DE3) pRARE(argU, argW, ilex, glyT, leuW, proL) (Cam^R)

Rosetta(DE3) Chemically Competent Cell 產品說明

Rosetta(DE3)菌株具有氯霉素抗性，補充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)對應的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統中的表達水平，該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區 (DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶)，同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。Rosetta(DE3)感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率高達10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. Rosetta(DE3)感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT 或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。