細胞傳代準備工作
3.1.1細胞傳代所需培養液及試劑需提前放置于生物安全柜內預熱至室溫備用。
3.1.2細胞傳代材料，滴管、移液管、培養器皿、計數板、橡皮乳頭。
3.2細胞傳代步驟
3.2.1人無菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒雙手。
3.2.2細胞傳代前先在倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數觀察。
3.2.3打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面30 min左右，關閉超凈工作臺的紫外燈，打開抽風機清潔空氣，除去臭氧。
3.2.4超凈工作臺面應整潔，用75％酒精溶液擦凈。
3.2.5貼壁細胞的傳代
3.2.5.1貼壁細胞用滴管或移液管吸去培養器皿中的舊培養液。
3.2.5.2酌情可用2～3 mL 0.02%EDTA溶液洗去殘留的舊培養基。
3.2.5.3以25ml培養瓶為例，向瓶內加入1ml消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養瓶，使消化液流遍所有細胞表面。
3.2.5.4在倒置顯微鏡下觀察，當細胞收回突起變圓或細胞間隙增大后，應立即終至消化。
3.2.5.5吸除或倒掉消化液，加入少量的含血清的新鮮培養液，終至消化。
3.2.5.6用彎頭滴管，吸取瓶內培養液，反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散，形成細胞懸液。
3.2.5.7計數，再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養液(7～10ml／大瓶，3～5 mL／小瓶)制成細胞懸液，然后分裝到新培養瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉，以利于CO2氣體的進入，將培養瓶放回CO2培養箱。
3.2.6半懸浮細胞及懸浮細胞培養的傳代
3.2.6.1半懸浮細胞先用滴管將細胞輕輕吹下來，把細胞懸浮液加入離心管離心（800～1000rpm, 5min），倒掉上清液。
3.2.6.2把細胞沉淀制成懸液，計數，再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養液移到培養器皿中培養。
3.2.6.3懸浮細胞直接用滴管或移液管吸入離心管離心（800～1000rpm, 5min），倒掉上清液。
3.2.6.4把細胞沉淀制成懸液，計數，再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養液移到培養器皿中培養。
3.2.6.5將培養器皿放回CO2培養箱培養（培養瓶培養需將瓶蓋旋開半圈）。
3.2.6.6操作完畢，填寫“細胞培養傳代記錄”。
3.3注意事項
3.3.1傳代培養時要注意無菌操作并防止細胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。每一種細胞使用一套器材。培養用液應嚴格分開。
3.3.2每天觀察細胞形態，掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代。
3.2.4細胞培養傳代吹打要輕柔不用用力過猛同時盡可能不要出現泡沫，這些都對細胞有損傷。