液相色譜法是分析化學中發展zui快、應用zui廣的一種分析方法，特別是液相色譜儀已經成為生命科學、材料科學、環境科學等方面*的重要檢測方法。現代科學技術的發展使得分析對象越來越復雜，分析要求越來越高，液相色譜的強大功能使其成為新世紀中解決生命科學、材料科學、環境科學等復雜體系發現難題的zui有力的技術和方法。
液相色譜儀是在經典液相色譜的基礎上，引入氣相色譜的理論和技術而發展起來的。在液相色譜中，流動相與組分之間有一定的親和力，分離過程的實現是組分、流動相和固定相三者間相互作用的結果，分離不但取決于組分和固定相的性質，還與流動相的性質密切相關，一般情況下，液相色譜儀的分析可在室溫下進行，由于采用顆粒極細的固定相，柱內壓降很大，加上流動相黏度高，因此必須采用高入口壓，以此來維持一定的流動相線速。液相色譜儀對于揮發性低、熱穩定性差、分子量大的物質特別有利，它在醫藥、生化等方面具有非常重要的作用。
色譜柱的常見問題：1.色譜柱污染：
目前,基層實驗室多采用反相色譜柱,要減少色譜柱的污染zui有效的辦法是要純化樣品。凡是樣品純化得越干凈,色譜柱的壽命就越長;反之,只有提取沒有純化的樣品,色譜柱柱效就會大幅下降。一般來說,要提取純化好的樣品,的方法是用流動相溶解樣品,這樣,一方面能減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也能檢查樣品在流動相中的溶解性。如果樣品進樣后在流動相中沉淀,會堵塞進樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現鬼峰。如果出現樣品與流動相不溶要設法改變溶解條件,可更換樣品溶劑,或改進樣品純化處理的方法,或濾過去除不溶性物質。
2.色譜柱阻塞與對策
如果配有保護柱,應先去掉保護柱進行分析。如果色譜柱阻塞,可進行反沖洗。如果問題仍然存在,色譜柱可能被強保留的污染物損壞,建議使用恰當的再生程序。如果問題仍然存在,可能是進口阻塞,更換入口處的篩板或更換色譜柱。如果必要,亦可更換色譜柱。
3.嚴格清場
清洗的過程是延長色譜柱壽命的關鍵,每次分析工作結束時,要做好清場工作。如果流動相是緩沖鹽,先用5%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動相是離子對,先用50%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動相是酸性溶劑,先用純水沖洗30 min以上,流速0.5 mL#min-1,zui后過度到用色譜甲醇沖洗色譜柱,目的是沖去吸附在柱上的強保留組分。如果用甲醇-水為流動相也應這樣沖洗色譜柱,在一定程度上可恢復柱效。
