關鍵詞:慢病毒載體構建，包裝，純化|實驗技術服務
簡介：世界*品牌慢病毒載體構建，包裝，純化|實驗技術服務原裝，質量保證,*。
慢病毒載體構建，包裝，純化|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
PI 染色操作步驟
1、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心，1500rpm , 5min，棄上清液。
2、加入PBS 1ml離心洗滌1次，棄上清。
3、加入2ml預冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定。
4、離心，棄上清液。
5、用1×PBS 1ml洗滌1次，離心。
6、加入RNase A (工作濃度20ug/ml)于500ul 1×PBS中，37℃孵育30min，離心。
7、用1×PBS 1ml洗滌1次，離心。
8、加入PI(工作濃度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室溫避光孵育30min。
9、混勻，過300目篩網，置流式管中， 4℃冰箱保存，待測。
細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
1、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心，1500rpm，5min，棄上清液。
2、以冷PBA 1ml，離心洗滌，棄上清液。
3、加入用PBA稀釋的熒光素標記的抗體200ul。用微量移液器輕輕吹打混勻，4℃或置冰上孵育30min-1h。
4、離心棄上清液。
5、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次，以除去未結合的多余抗體成分。
6、向細胞中加入冷PBS 500ul,吹打混勻，置流式管中，4℃避光保存，待測。
胞內直接免疫熒光染色操作步驟
1、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心，1500rpm , 5min，棄上清液。
2、用1×PBS1ml洗滌1次，離心。
3、4%PFA 1ml，4℃固定30min。
4、用1×PBS1ml洗滌1次，離心。
5、0、1% Triton-100 1ml, 室溫10min。
6、用1×PBS1ml洗滌1次，離心。
7、加入用PBA稀釋的熒光素標記的抗體200ul，用微量移液器輕輕吹打混勻，4℃或置冰上孵育30min-1h。
8、離心棄上清液。
9、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次，以除去未結合的多余抗體成分。
10、向細胞中加入冷PBS500ul,吹打混勻，置流式管中，4℃避光保存，待測。
備注：                                                
1、RNase A：貯液濃度：1mg/ml；
工作液配制：加1 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中，使終濃度為 20ug/ml。
2、PI：貯液濃度：2、5mg/ml；       
工作液配制：加2、5 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中，使終濃度為 50ug/ml。
3、PBA：即PBS加1-2% 牛血清白蛋白，加0、1%疊氮鈉。
4、檢測樣品細胞濃度1x106 /ml。
慢病毒載體構建包裝實驗流程如下：
1.根據目的基因相關信息（序列，基因序列號等），構建含有外源基因或序列的重組載體；
2.對于測序正確的重組質粒，提取和純化高質量（不含內毒素）的重組質粒；
3.使用重組載體和慢病毒包裝質粒共轉染293T細胞，進行病毒包裝并收集上清液；
4.通過超濾和超速離心濃縮和純化病毒；
5.用病毒液感染293T細胞，測定病毒滴度；