特異性強:經過精心篩選和優化的抗體,對目標物具有高度特異性,幾乎不會與其他結構相似的物質發生交叉反應。有效避免了假陽性結果的出現,為檢測結果的準確性提供了堅實保障。
重復性好:嚴格的生產工藝和完善的質量控制體系,確保了試劑盒批內和批間的良好重復性。多次重復檢測同一批次樣本,結果的變異系數(CV)被嚴格控制在極小范圍,實驗人員能夠獲取穩定可靠的數據,為科學研究的可重復性奠定基礎。
操作簡便:試劑盒配備了齊全的試劑和詳細易懂的操作說明書,實驗步驟簡潔明了。即使是初次接觸的實驗人員,也能快速上手操作,無需復雜的儀器設備和高深的專業技能,極大地節省了實驗時間和人力成本。
檢測范圍廣:其檢測范圍覆蓋了目標物在正常生理以及多種常見病理狀態下的濃度區間。既能精準檢測正常情況下的低水平表達,也能準確測定在疾病或實驗干預后可能出現的高水平變化,適用于各類相關研究場景和臨床診斷需求。
樣本準備:依據實驗目的收集合適的樣本,如血清、血漿、組織勻漿、細胞培養上清等。確保樣本采集過程嚴格規范,避免樣本污染、溶血、脂血等情況干擾檢測結果。若樣本采集后不能立即檢測,需妥善保存于 -20℃或 -80℃冰箱,防止反復凍融。
試劑準備:從冰箱取出試劑盒,待其恢復至室溫后,按照說明書依次準備好標準品、酶標二抗、底物、洗滌液等試劑。標準品需進行系列倍比稀釋,用于繪制標準曲線。
加樣:將稀釋好的標準品和處理后的樣本加入到預包被有特異性抗體的固相載體中,同時設置空白對照和陰性、陽性對照孔。輕輕振蕩使液體充分混合均勻,然后將反應體系置于適宜溫度(通常為 37℃)的恒溫孵育箱中孵育一段時間,促使樣本中的目標物與固相抗體充分結合。
洗滌:孵育結束后,倒掉反應體系中的液體,用洗滌液充分洗滌固相載體,一般需洗滌 5 次左右,以徹di清除未結合的物質,降低非特異性背景信號。每次洗滌后要確保固相載體充分瀝干。
加酶標二抗:向固相載體中加入適量的酶標二抗,再次輕輕振蕩混勻,放入恒溫孵育箱中孵育,讓酶標二抗與已結合的目標物充分結合。
再次洗滌:重復洗滌步驟,去除未結合的酶標二抗。
顯色 / 檢測信號:向固相載體中加入底物工作液,輕輕振蕩混勻,將反應體系置于適宜條件下(如 37℃避光環境)孵育,此時酶標二抗上的酶會催化底物發生反應,產生可檢測的信號。若為顏色反應,顏色會逐漸加深;若為熒光反應,則需使用熒光檢測儀檢測熒光強度。
終止反應(若有必要):當信號達到合適強度或顯色達到預期效果時,加入終止液終止反應,使信號穩定下來。立即使用相應的檢測儀器在特定波長下測定各孔的信號值,如使用酶標儀測定吸光度。
結果計算:根據標準品的信號值繪制標準曲線,依據樣本的信號值從標準曲線上查出對應的目標物濃度,并結合樣本的稀釋倍數進行校正,最終得出樣本中目標物的實際濃度。