高靈敏度:能夠敏銳捕捉到極微量的 OH-PYD,檢測下限可達納克甚至皮克級別。即便樣本中 OH-PYD 低表達,也能精準測定其含量,助力科研人員探究其在正常生理及病理狀態下低水平表達時的功能。
特異性強:試劑盒內的抗體經過嚴格篩選與優化,對 OH-PYD 具有ji高特異性,與其他結構相似的生物分子及干擾物質幾乎不存在交叉反應。有效避免了假陽性結果的出現,極大地保障了檢測結果的準確性與可靠性。
重復性佳:憑借嚴格的生產工藝和完善的質量控制體系,該試劑盒批內和批間重復性表現優異。多次重復檢測同一批次樣本,結果的變異系數(CV)被嚴格控制在極小范圍,實驗人員能夠獲取穩定且可重復的數據,有力地支持了科學研究的可重復性。
操作便捷:試劑盒配備了齊全的試劑以及詳盡的操作說明書,實驗步驟清晰明了。即便新手實驗人員,也能快速上手操作。整個檢測流程無需復雜的儀器設備和高深的專業技能,顯著節省了實驗時間與人力成本。
檢測范圍寬:其檢測范圍覆蓋了 OH-PYD 在正常生理以及多種病理狀態下常見的濃度區間。既能精準檢測正常情況下低水平的 OH-PYD 表達,也能準確測定在疾病或實驗干預后可能出現的高水平 OH-PYD 變化,適用于各類相關研究場景。
樣本準備:根據實驗目的收集血清、血漿、組織勻漿、細胞培養上清等樣本。確保樣本采集過程規范,避免污染、溶血等情況干擾檢測結果。若樣本采集后需保存,應置于 - 20℃或 - 80℃冰箱,防止反復凍融。樣本解凍時應在 4℃緩慢進行,避免溫度過高影響 OH-PYD 活性。
試劑準備:從冰箱取出試劑盒,使其恢復至室溫。按照說明書依次準備好標準品、酶標二抗、底物、洗滌液等試劑。標準品需進行系列倍比稀釋,用于繪制標準曲線。準備試劑時要確保操作環境清潔,使用干凈的移液器及槍頭,不同試劑的移液器分開使用,防止交叉污染。
加樣:將稀釋好的標準品和處理后的樣本加入預包被有抗 OH-PYD 抗體的固相載體中,同時設置空白對照孔。輕輕振蕩使液體混合均勻,隨后將反應體系置于 37℃恒溫孵育箱孵育一段時間,促使樣本中的 OH-PYD 與固相抗體充分結合。加樣時要保證移液器的準確性,加樣體積精準,避免產生氣泡影響檢測結果。
洗滌:孵育結束后,倒掉反應體系中的液體,用洗滌液充分洗滌固相載體,一般需洗滌 5 次左右,以徹di清除未結合的物質,降低非特異性背景信號。每次洗滌后要確保固相載體充分瀝干。
加酶標二抗:向固相載體中加入適量的酶標二抗,再次輕輕振蕩混勻,放入 37℃恒溫孵育箱孵育一段時間,讓酶標二抗與已結合的 OH-PYD 充分結合。加酶標二抗時要避免試劑滴落在孔外。
再次洗滌:重復洗滌步驟,去除未結合的酶標二抗。操作要求與第一次洗滌一致,確保洗滌徹di。
顯色 / 檢測信號:向固相載體中加入底物工作液,輕輕振蕩混勻,將反應體系置于適宜條件下(如 37℃避光環境)孵育,此時酶標二抗上的酶會催化底物發生反應,產生可檢測的信號。若為顏色反應,顏色會逐漸加深;若為熒光反應,則需使用熒光檢測儀檢測熒光強度。顯色過程要嚴格控制時間,避免顯色過度或不足,且孵育環境需保持避光。
終止反應(若有必要):當信號達到合適強度或顯色達到預期效果時,加入終止液終止反應,使信號穩定下來。立即使用相應的檢測儀器在特定波長下測定各孔的信號值,如使用酶標儀測定吸光度。加入終止液后應迅速測量信號值,以免溶液長時間放置導致結果偏差。
結果計算:根據標準品的信號值繪制標準曲線,依據樣本的信號值從標準曲線上查出對應的 OH-PYD 濃度,并結合樣本的稀釋倍數進行校正,最終得出樣本中 OH-PYD 的實際濃度。計算過程要仔細核對數據,確保結果準確無誤。