12
NSE ELISA
NSE ELISA，即神經(jīng)元特異性烯醇化酶（Neuron - Specific Enolase）酶聯(lián)免疫吸附測定，是一項在神經(jīng)科學(xué)及臨床診斷領(lǐng)域應(yīng)用廣泛的檢測技術(shù)，主要用于精準(zhǔn)定量生物樣本中的 NSE 含量。NSE 是一種在神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中特異性表達(dá)的糖酵解酶，其在生物樣本中的含量變化，對神經(jīng)系統(tǒng)疾病及某些腫瘤的診斷、病情監(jiān)測和預(yù)后評估具有重要意義。
工作原理
NSE ELISA 主要基于雙抗體夾心 ELISA 技術(shù)。實驗前，將針對 NSE 的捕獲抗體包被在固相載體（如微孔板）表面。當(dāng)含有 NSE 的生物樣本，如血清、血漿、腦脊液等加入包被有捕獲抗體的微孔板孔內(nèi)時，樣本中的 NSE 會迅速與固相化的捕獲抗體特異性結(jié)合。經(jīng)過精心設(shè)計的多次洗滌步驟，去除未結(jié)合的雜質(zhì)、其他蛋白及干擾物質(zhì)后，加入酶標(biāo)記的檢測抗體。該酶標(biāo)檢測抗體能夠精準(zhǔn)地識別并結(jié)合已經(jīng)與捕獲抗體結(jié)合的 NSE，從而形成穩(wěn)固的 “捕獲抗體 - NSE - 酶標(biāo)檢測抗體" 免疫復(fù)合物。再次進(jìn)行全面且徹di的洗滌，確保未參與結(jié)合反應(yīng)的酶標(biāo)檢測抗體被wan全清除后，加入特定的酶底物溶液。在酶的高效催化作用下，底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測信號，一般表現(xiàn)為顏色變化。產(chǎn)生的信號強(qiáng)度與樣本中的 NSE 含量嚴(yán)格呈正相關(guān)。通過酶標(biāo)儀精確測定反應(yīng)體系的吸光度數(shù)值，并依據(jù)預(yù)先嚴(yán)謹(jǐn)繪制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可準(zhǔn)確計算出樣本中 NSE 的濃度。
操作流程
操作流程相對規(guī)范且清晰。首先要妥善準(zhǔn)備樣本，嚴(yán)格遵循樣本采集、儲存和處理的規(guī)范，以保證 NSE 的穩(wěn)定性。將包被好捕獲抗體的微孔板平衡至室溫，按設(shè)定的樣本加樣量依次加入標(biāo)準(zhǔn)品、空白對照以及待測樣本，置于適宜溫度（通常為 37℃）的恒溫孵育箱中孵育一段時間，使抗原抗體充分結(jié)合。孵育結(jié)束后，使用洗滌緩沖液對微孔板進(jìn)行多次洗滌，這一步驟對于去除未結(jié)合物質(zhì)、降低背景干擾十分關(guān)鍵，洗滌是否徹di直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。隨后加入酶標(biāo)檢測抗體，再次孵育，使免疫復(fù)合物充分形成。再次洗滌后，加入酶底物溶液，在避光條件下反應(yīng)一定時間，待顏色變化明顯后，加入終止液終止反應(yīng)，最后使用酶標(biāo)儀在特定波長下測定各孔的吸光度值。
樣本適用性
血清樣本采集較為方便，能夠反映機(jī)體循環(huán)系統(tǒng)中的 NSE 水平，是較為常用的檢測樣本之一，采集后需及時離心分離。血漿樣本同樣適用，在采集時需嚴(yán)格遵循抗凝劑的使用規(guī)范，防止血液凝固對 NSE 活性和含量造成影響。腦脊液樣本在神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究中具有du特的價值，由于其直接與神經(jīng)組織接觸，所含的 NSE 能更直接地反映神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的相關(guān)情況，但采集腦脊液需要專業(yè)的醫(yī)療操作，以確保樣本的質(zhì)量和安全性。
優(yōu)勢與應(yīng)用領(lǐng)域
NSE ELISA 具有高靈敏度的顯著優(yōu)勢，能夠檢測到極低濃度的 NSE，滿足科研和臨床檢測中對微量樣本檢測的嚴(yán)苛要求。其特異性強(qiáng)，通過抗原抗體的高度特異性結(jié)合，可有效排除樣本中其他成分的干擾，保證檢測結(jié)果真實可靠地反映 NSE 的實際水平。操作流程相對簡便，實驗步驟清晰明了，經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的人員即可按照詳細(xì)的說明書順利完成實驗操作。在應(yīng)用方面，它廣泛應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究，如腦梗死、腦出血、腦腫瘤等，通過檢測 NSE 含量的變化，有助于早期診斷疾病、評估病情嚴(yán)重程度以及監(jiān)測治療效果。在小細(xì)胞肺癌等神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的診斷和病情監(jiān)測中，也發(fā)揮著重要作用，為臨床醫(yī)生制定合理的治療方案提供重要參考 。