Mouse Flt-3L ELISA Kit
Mouse Flt-3L ELISA Kit即小鼠 Fms 樣酪an酸激酶 3 配體(Flt-3L)酶聯免疫吸附測定試劑盒。
檢測原理
包被:將針對小鼠 Flt-3L 的特異性捕獲抗體預包被在酶標板的孔壁上,形成固相抗體。
抗原抗體結合:加入待檢測的小鼠樣本,樣本中的 Flt-3L 會與固相化的捕獲抗體特異性結合。
形成夾心結構:再加入生wu素標記的檢測抗體,它能夠與已結合在捕獲抗體上的 Flt-3L 特異性結合,從而形成 “捕獲抗體 - Flt-3L - 生wu素化檢測抗體" 的夾心復合物。
酶結合:隨后加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素,鏈霉親和素與生wu素具有高度親和力,會特異性結合到生wu素化的檢測抗體上。
顯色與檢測:加入底物溶液,如四甲基聯苯胺(TMB),在 HRP 的催化作用下,TMB 發生顯色反應,顏色由無色變為藍色,顏色的深淺與樣本中 Flt-3L 的濃度成正比。最后加入終止液終止反應,使用酶標儀在特定波長下測定吸光度值,通過與標準曲線對比,計算出樣本中 Flt-3L 的含量。
試劑盒組成
預包被板:一般為 96 孔或 48 孔聚苯乙烯板,表面已包被好捕獲抗體,為 Flt-3L 的結合提供固相載體。
標準品:一系列已知濃度的 Flt-3L 蛋白標準溶液,用于繪制標準曲線,通常濃度范圍覆蓋了試劑盒的檢測范圍。
檢測抗體:生wu素標記的特異性抗體,可與 Flt-3L 特異性結合,用于檢測已與捕獲抗體結合的 Flt-3L。
酶結合物:通常是 HRP 標記的鏈霉親和素,用于與生wu素化的檢測抗體結合,催化底物顯色反應。
底物溶液:常用 TMB 溶液,在 HRP 的作用下發生顯色反應,產生可檢測的信號。
終止液:如硫酸溶液,用于終止顯色反應,使顏色穩定以便于酶標儀讀數。
洗滌緩沖液:用于洗滌酶標板,去除未結合的物質,減少非特異性信號。
稀釋液:用于稀釋樣本、標準品和檢測抗體等,使其達到合適的工作濃度。
適用樣本類型
血清:采集小鼠血液后自然凝固,離心后得到的上清液,可反映小鼠體內循環系統中 Flt-3L 的水平。
血漿:使用抗凝劑采集小鼠血液,離心后獲得的上清液。不同抗凝劑可能對檢測結果有影響,需按試劑盒要求選擇。
細胞培養上清:培養小鼠細胞后收集的培養液,可用于檢測細胞分泌到細胞外的 Flt-3L。
組織勻漿:將小鼠組織經過研磨等處理制成勻漿,離心后的上清液,可用于檢測組織中 Flt-3L 的表達情況。
性能指標
靈敏度:一般可達到較低的檢測限,如某些試劑盒的靈敏度可達幾 pg/ml,能夠檢測到樣本中極低濃度的 Flt-3L。
檢測范圍:通常有一個較寬的檢測區間,例如 10 - 1000 pg/ml,以滿足不同樣本中 Flt-3L 含量的檢測需求。
精密度:包括板內精密度和板間精密度,以變異系數(CV%)表示。優質的試劑盒板內 CV% 通常小于 10%,板間 CV% 小于 15%,保證實驗結果的重復性和穩定性。
特異性:試劑盒中的抗體對小鼠 Flt-3L 具有高度特異性,與其他類似蛋白或物質的交叉反應極低,確保檢測結果準確反映 Flt-3L 的含量。
應用領域
血液學研究:在研究小鼠造血系統疾病如白血病、再生障礙性貧血等時,通過檢測 Flt-3L 的水平,可了解造血微環境的變化以及造血干細胞的增殖分化狀態,為疾病的診斷和治療提供依據。
免疫學研究:在研究免疫細胞的發育和免疫反應的調節時,Flt-3L 與樹突狀細胞等免疫細胞的發育和功能密切相關。使用該試劑盒檢測 Flt-3L 含量,有助于深入了解免疫調節機制以及免疫相關疾病的發病機制。
腫瘤研究:在小鼠腫瘤模型中,Flt-3L 的表達與腫瘤的生長、轉移和免疫逃逸等過程有關。檢測腫瘤組織或血清中的 Flt-3L 水平,可為腫瘤的治療和預后評估提供參考。