人間充質干細胞無血清培養基

重慶市華雅干細胞技術有限公司的干細胞研究產品主要包括：生長因子、通路調控因子、干細胞培養基、細胞株等，并且在倉庫備有人間充質干細胞無血清培養基現貨。歡迎新老客戶：   

    Human MSC medium (Chemically-Defined) 人間充質干細胞無血清培養基間充質干細胞具有光明的臨床治療前景。然而，常用培養基含有胎牛血清（FBS），增加了病原體、異種抗原、批間不穩定性。美國FDA正考慮禁止使用FBS于細胞治療。提供的Human MSC medium ( Chemically-Defined )，是一種無血清、無異種蛋白、化學成分明確的人間充質干細胞培養基，且無需昂貴的鋪板蛋白，生長分化更優于血清培養基。
    該培養基是為擴增從骨髓、臍帶血或脂肪組織提取的人類間充質干細胞而設計的無血清培養基。它化學成分明確，所有組分為化學合成或重組純化的蛋白。它無異源蛋白，不含直接從任何動物組織提取成份。因此它不存在批間誤差和潛在的動物源性病原體。如果配合使用特定的培養板，還可以省去鋪板的工序和時間，免去鋪板膠的費用。
本產品組成及保存Human MSC medium (Chemically-Defined)（ 人間充質干細胞無血清培養基貨號MGro-500）
產品組成：

產品組成           規格      儲存                     保質期      
 
基礎液           450ml        2 ‐ 8°C, 避光保存      6個月

添加物            50ml       ‐ 80°C, 避光保存        6個月
 

重慶市華雅干細胞技術有限公公司還可以提供：其它所需試劑：
? L‐谷氨酸鹽（L‐Glutamine),或同類產品；
? 選擇不鋪板：建議使用BD公司的培養板或 Corning公司的培養板
? 選擇鋪板：Fibronectin或同類產品；
? 胰酶Trypsin 0.05%/0.53mM EDTA或同類產品；
培養基配制：
1.解凍添加物。建議2‐8°C解凍。解凍后的溶液可以分裝，于‐80°C保存，盡量避免反復凍融。
2.配制100ml人間充質干細胞*培養基，需在無菌條件下添加10ml添加物于90ml基礎液中，再加入1ml 200mM L‐谷氨酸鹽；
3.如果需要也可加入抗菌素（自選）。
    配制好的*培養液（包含基礎液、補充液、谷氨酸鹽）2‐8°C避光保存，保存期為1個月。從其它培養基向本產品逐漸培養于其它無血清或有血清培養基的MSCs可以快捷方便地轉換到該產品培養。多數情況下，直接轉換便可。個別情況下，可能需要逐步轉換，如20%, 40%,依次遞增。
復蘇hMSCs細胞：
1.37°C水浴快速復蘇凍融細胞。
2.將細胞轉移到50ml離心管中。
3.逐滴向裝有1ml細胞液的離心管中加入10ml預先復溫的人間充質干細胞*培養基，注意邊加邊輕輕晃動離心管。
4.將上述混合溶液轉移到細胞培養瓶或細胞培養板中?；蛘呖?50xg（～1200rpm）離心10min，再用*培養基重懸后再轉移到細胞培養板中。
5.在4-6%CO2，36‐38°C培養箱孵化。
6.孵化24h，換一次培養液。
7.此后每隔2天換一次液，直到傳代培養。
傳代培養：
    當使用特定的細胞培養板，如BD PrimariaTM系列或corning CellBINDTM系列時，使用該培養基是不需要預先鋪板。傳統的細胞培養瓶和培養板正在評估中。對于那些還沒有被評估的產品或不適用于不預先鋪板工序的產品，推薦使用Fibronectin進行鋪板。
1.在鏡下觀察細胞，確定傳代的時間。為了保證MSCs的生長潛力，推薦在細胞量達到70%滿的時候傳代。如果細胞量達到80%以上滿時，細胞在傳代之后可能出現停止增殖的現象。切記，在任何情況下，不要讓細胞超出80%滿！
2.預先將0.05%胰酶和*培養基復溫到37°C待用。
3.用移液槍吸走舊培養基。
4.用DPBS洗一遍（自選）。
5.加入0.05%胰酶以覆蓋住細胞表面，推薦室溫消化細胞（消化液用量：6孔板每一孔約10cm2加入0.5ml，25cm2培養板加入1ml）。
6.鏡下觀察細胞，當看見細胞開始從培養板剝離，輕輕敲擊培養板邊緣幫助細胞脫落。消化時間為1‐3分鐘。注意，消化時間會比在有血清的培養基中培養的細胞要短。當所有細胞都脫落時，快速采取以下步驟。（不要在所有細胞都脫落后，保持在胰酶中太長時間，因為這樣會影響MSCs以后的生長狀態）。
7.加入2倍于消化液的*培養基，將細胞懸液收集于15ml離心管中。（如果是使用胰酶消化細胞，可以使用大豆酶抑制劑來終止胰酶。尤其是當以下步驟8洗細胞不能在10分鐘內被完成的情況下，這一步是非常必要的。原因是這類無血清培養基中都不含抗胰蛋白酶。除非快速離心分離，否則培養基中留存的胰蛋白酶會破壞細胞并影響其生長能力。）
8.1200rpm離心10分鐘。
9.盡量棄去離心后的上層清液。用*培養基重懸細胞。此時可取細胞懸液進行細胞計數。
10.按照3~5X103細胞量/cm2接種細胞。上下左右輕輕搖勻細胞以保證細胞在培養板里的均勻分布。細胞接種密度：6孔板每一孔約10cm2約3~5X104細胞，25cm2培養板約0.75~1.25X105細胞。
11.4~6%CO2，37°C培養。
12.每隔2天換新鮮的*培養基。
13.當細胞量達到70%滿時，傳代（一般每隔3-4天）。
凍存細胞:
1.配制細胞凍存液：90%*培養液 + 10%DMSO。
2.離心分離細胞，用凍存液重懸細胞，使細胞密度為1~5x106/ml，轉移到凍存管中。
3.將凍存管轉移到凍存盒中，依次置于4度-負20度- 負80度冰箱。
4.將細胞轉移到液氮罐中長期貯存。
僅供研究研究使用，不用于人的診斷及治療。

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