 | 重慶市華雅干細胞技術(shù)有限公司 |
13
15021010459
當前位置：首頁>>公司動態(tài)>>細胞適應(yīng)干細胞無血清培養(yǎng)基的方法
在線溝通：
顏先生 （經(jīng)理）
- 電話：
- 400-021-2200
- 手機：
- 15021010459
- 傳真：
- 023-63419626
- 聯(lián)系我時，
- 告知來自化工儀器網(wǎng)
- 個性化：
- www.hystemcell.cn
- 商鋪網(wǎng)址：
- http://www.zjmenchuan.com/st275923/
- 公司網(wǎng)站：
- https://www.ys-bio.cn/
細胞適應(yīng)干細胞無血清培養(yǎng)基的方法
閱讀：1536發(fā)布時間：2015-9-23
血清仍是動物細胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養(yǎng)液。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續(xù)保留，很少有細胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。
干細胞無血清培養(yǎng)基采用經(jīng)過優(yōu)化的配方配制，不含血清，無異源動物成分，且化學(xué)成分明確。適用于多種人來源間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)。經(jīng)驗證，在S&XFM-CDTM間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)條件下，間充質(zhì)干細胞能快速生長，且能有效的維持間充質(zhì)干細胞的形態(tài)、表型和分化能力。
細胞適應(yīng)干細胞無血清培養(yǎng)基的方法：
1.直接適應(yīng)——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。
一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對于直接適應(yīng)，接種細胞密度應(yīng)該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時，傳代培養(yǎng)細胞。當細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時，細胞*適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中，與直接適應(yīng)相比較，連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩毎訙睾鸵恍?/div>
（1）以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25%SFM 混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。
（2）當細胞密度>5×10細胞/ml時，以2×10到3×10細胞/ml細胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
（3）以2×10到3×10細胞/ml細胞密度，25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。
（4）當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml（接種后4到6天），在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
（5）每隔3到5天，當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物，直到每一次細胞適應(yīng)了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進行幾次傳代。
在適應(yīng)過程中，不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養(yǎng)基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì)，因而更易于受外界因素的影響。
細胞培養(yǎng)適應(yīng)替代血清：許多細胞利用連續(xù)適應(yīng)方法能很好的適應(yīng)，用包含F(xiàn)BS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1（v∶v）的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。通過下列的混合培養(yǎng)基的方式，連續(xù)幾代減少當前培養(yǎng)基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100%替代培養(yǎng)基。每次適應(yīng)改變血清比例時，傳代細胞2到3次。
培養(yǎng)可以直接從FBS轉(zhuǎn)換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長的延遲可能會發(fā)生，4允許進行2到3次的傳代，使生長率恢復(fù)到以前的水平。
特別需要強調(diào)的是：配制無血清培養(yǎng)液必須使用高質(zhì)量的水，如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子，既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微，也可能對細胞產(chǎn)生致死性損害。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵因素之一。
重慶市華雅干細胞技術(shù)有限公司主營產(chǎn)品：Lonza支原體檢測試劑盒,Stemcell胚胎干細胞培養(yǎng)基,StemRD生長分化因子
化工儀器網(wǎng) 設(shè)計制作，未經(jīng)允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.zjmenchuan.com, All rights reserved.
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責，化工儀器網(wǎng)對此不承擔任何保證責任。 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
