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分享重組人纖粘連蛋白片段包被培養(yǎng)板的制備

閱讀：1279 發(fā)布時(shí)間：2022-10-17

將重組人纖粘連蛋白片段包被于培養(yǎng)板上，濃度20-100μg/ml的重組人纖粘連蛋白片段可達(dá)到4-20μg/cm2的包被密度。

1.包被前，用無(wú)菌PBS將該溶液稀釋至20-100μg/ml。【請(qǐng)?zhí)崆坝?jì)算重組人纖粘連蛋白試劑的用量，如：2.25ml濃度為20μg/ml的重組人纖粘連蛋白溶液放入直徑為35mm的培養(yǎng)皿（9cm2）中時(shí)，用于包被的密度為5μg/cm2】

注意：為避免重組人纖粘連蛋白片段丟失，請(qǐng)勿將PBS稀釋的重組人纖粘連蛋白溶液過(guò)濾除菌。

2.將適當(dāng)體積（24孔板中每孔0.5ml，或6孔板每孔2ml。）的無(wú)菌重組人纖粘連蛋白溶液分配到每個(gè)板中，讓板在室溫下靜置2小時(shí)或在4℃過(guò)夜。

注意:在此步驟中應(yīng)使用未經(jīng)處理的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)組織培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿。

3.移除重組人纖粘連蛋白溶液，然后用適量含無(wú)菌2%牛血清白蛋白(BSA，F(xiàn)ractionV)的PBS溶液進(jìn)行封閉（24孔板中每孔0.5ml，或6孔板每孔2ml），讓板在室溫下靜置30分鐘。

4.移除BSA溶液，用適當(dāng)體積的HBSS/Hepes或PBS清洗一次。除去洗滌液后，即可使用。重組人纖粘連蛋白片段包被板可用封板膜密封，并在4℃下儲(chǔ)存—周。