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免疫組化(IHC)和原位雜交技術(shù)(ISH)在癌癥中的不同應(yīng)用

閱讀:773        發(fā)布時(shí)間:2023-12-7

免疫組織化學(xué)(IHC)是一種非常有價(jià)值的工具,用于檢測、定位和量化保存組織中的抗原,以達(dá)到研究和診斷的目的。這種方法因其方便、可靠和多功能性而被廣泛用于診斷和研究。在IHC中,抗原抗體復(fù)合物可通過熒光檢測顯現(xiàn)出來。不過,它們通常是通過光顯微鏡來觀察的,而不是使用顏色信號,這種方法被稱為顯色檢測。與免疫熒光技術(shù)相比,顯色I(xiàn)HC的優(yōu)勢在于通過蘇木精復(fù)染,特異抗原周圍的組織形態(tài)清晰可見。染色I(xiàn)HC標(biāo)記的結(jié)果以半定量方式報(bào)告,具有重要的診斷和預(yù)后意義,特別是在區(qū)分良性和惡性病變方面。

圖1. 小鼠抗CD44抗體(克隆號SFF-304)和兔抗Ki-67抗體(克隆號MIB-1)與MULTIVIEW® PLUS(mouse-HRP/rabbit-AP)試劑盒(ENZ-KIT181-0150,Enzo Life)配合使用,進(jìn)行多重免疫組化染色,蘇木精用作復(fù)染劑。

 

原位雜交

原位雜交(ISH)是一種du特的分子分析方法,因?yàn)樗茉陲@微鏡下精確定位中期染色體涂片、細(xì)胞和組織中的DNA、mRNA和microRNA等核酸。1969年8月,兩個(gè)獨(dú)立的研究小組首ci對該方法進(jìn)行了描述。原則上,ISH包括:(a)細(xì)胞或組織樣本的固定和預(yù)處理,以方式保存目標(biāo)核酸;(b)標(biāo)記探針通過互補(bǔ)堿基配對與目標(biāo)雜交;最后,(c)檢測標(biāo)記,以便在顯微鏡下觀察雜交。與IHC相似,探針的檢測可通過顯色或熒光技術(shù)實(shí)現(xiàn),分別稱為顯色原位雜交(ISH)或熒光原位雜交(FISH)。FISH已成為對可能最終導(dǎo)致癌癥發(fā)生的基因畸變進(jìn)行分子分析的一種特別強(qiáng)大的工具。

圖2. Nick Translation DNA Labeling System 2.0(ENZ-GEN111-0050,Enzo Life)用Orange 552 dUTPENZ-42842,Enzo Life)標(biāo)記TP53的BAC DNA 探針,用Green 496 dUTP(ENZ-42831,Enzo Life)標(biāo)記中心粒17的BAC DNA 探針。標(biāo)記的探針與中期染色體涂片雜交。(圖片來源于盧茲腫瘤大學(xué)研究所)

 

IHC在癌癥中的應(yīng)用

IHC 是一種利用單克隆和多克隆抗體檢測組織切片中特定抗原的方法,是癌癥研究人員和外科病理診斷醫(yī)師的一個(gè)非常強(qiáng)大的工具。通過IHC,可以確定相關(guān)抗原在健康和疾病狀態(tài)下的組織分布。IHC被廣泛應(yīng)用于癌癥研究和診斷,因?yàn)樘囟ǖ哪[瘤抗原只有在某些癌癥類型中才會(huì)重新表達(dá)或上調(diào)。因此,IHC在研究和病理學(xué)中發(fā)揮著重要作用,尤其是在腫瘤病理學(xué)、神經(jīng)bing理學(xué)和血液病理學(xué)等亞專業(yè)領(lǐng)域。雖然組織的基本組織學(xué)檢查仍被認(rèn)為是有用和必要的步驟,但I(xiàn)HC能提供更多更詳細(xì)的見解。IHC可用于癌癥研究中的各種應(yīng)用,如腫瘤標(biāo)志物的鑒定和監(jiān)測、腫瘤診斷(尤其是來源不明的腫瘤)、腫瘤預(yù)后以及預(yù)測乳腺癌和前列腺癌的治療反應(yīng)。

圖3. 宮頸組織先用抗Ki-67抗體(小鼠)染色,然后用生物素偶聯(lián)的抗小鼠二抗染色,再用SAVIEW® PLUS HRP Reagent(ENZ-ACC102-0150,Enzo Life) 染色。

 

ISH在癌癥中的應(yīng)用

FISH是一種功能強(qiáng)大的技術(shù),主要用于檢測染色體異常。FISH的靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測速度快,使其成為一項(xiàng)舉足輕重的細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù),在血液惡性腫瘤和實(shí)體瘤的研究和診斷方面都取得了重大進(jìn)展。從醫(yī)學(xué)角度看,F(xiàn)ISH可用于檢測基因畸變,如基因融合、非整倍體或染色體缺失。它還可用于監(jiān)測畸變的進(jìn)展或鑒定新的致癌基因。現(xiàn)在,病毒感染在某些癌癥類型的發(fā)展中的重要性已被廣泛證實(shí),ISH也為人類乳頭瘤病毒(HPV)感染相關(guān)癌癥的診斷和研究提供了一個(gè)強(qiáng)大的工具。Enzo Life于1986年開發(fā)出*款用于ISH檢測的非放射性HPV探針,可用于監(jiān)測細(xì)胞和組織樣本中病毒載量。

圖4. 用PATHO-GENE® HPV 16/18/31/33/51(ENZ-32882,Enzo Life)篩查宮頸組織,然后用SAVIEW® PLUS HRP Reagent(ENZ-ACC102-0150,Enzo Life)進(jìn)行篩查。

 

EnzoLife提供多樣的HPV病毒、經(jīng)典的腫瘤靶點(diǎn)(EGFR)、GADPH以及泛素化等Ready-to-use型的RNA原位雜交探針。

部分相關(guān)產(chǎn)品推薦:

貨號產(chǎn)品名規(guī)格
ENZ-GEN145-2000AMPIVIEW™ HPV 6/11 RNA Probes Set2 ml
ENZ-GEN146-2000AMPIVIEW™ HPV 16/18 RNA Probes Set2 ml
ENZ-GEN147-2000AMPIVIEW™ HPV 31/33/51 RNA Probes Set2 ml
ENZ-32886PATHO-GENE® HPV type 16/18 probe1 ml
ENZ-32886-6000
6 ml
ENZ-GEN114-6000DIGX® HPV type 16/18/31/33/51 probe6 ml
ENZ-GEN114-1000
1 ml
ENZ-GEN125-2000AMPIVIEW™ Ubiquitin (AS) Dig RNA Probes Set2ml
ENZ-GEN129-2000AMPIVIEW™ EGFR (AS) Dig RNA Probes Set2ml
ENZ-GEN127-2000AMPIVIEW™ GAPDH (AS) Dig RNA Probes Set2ml

除此之外,如果沒有找到合適的商品化RNA探針,也可以對想要檢測到靶點(diǎn)自行定制特異性的RNA探針(如圖5)。

圖5. 原位雜交探針的定制

 

下表是可用于IHC、FISH或ISH自己定制探針產(chǎn)品的相關(guān)推薦:

ProductIHCFISHISH
BIO-PROBE® Nick translation kit with Bio-16-dUTP

??
BIO-PROBE® Random primed kit with bio-16-dUTP

??
BIO-PROBE® Random primed kit with fluorescein-12-dUTP
??
Aqua 431 dUTP
??
Gold 525 dUTP
??
Green 496 dUTP
??
Orange 552 dUTP
??
Red 580 dUTP
??
Nick translation DNA labeling system 2.0
????
Cyanine 3-UTP (enhanced)
??
Cyanine 5-UTP (enhanced)
??
Digoxigenin-dUTP, alkali-stable
????
DIGX® HPV type 16/18 probe

??
DIGX® Mouse anti-digoxigenin linker (Ready-to-Use)

??
Digoxigenin-UTP, alkali-stable
????
HIGHDEF® black IHC chromogen (HRP)??
??
HIGHDEF® blue IHC chromogen (AP)??
??
HIGHDEF® green IHC chromogen (AP)??
??
HIGHDEF® yellow IHC chromogen (HRP)??
??
MULTIVIEW® PLUS (mouse-HRP/rabbit-AP) IHC Kit (Brown/Green)??
??
POLYVIEW® PLUS AP (anti-rabbit) reagent??
??
POLYVIEW® PLUS HRP (anti-mouse) reagent??
??
POLYVIEW® PLUS HRP (anti-rabbit) reagent??
??
SAVIEW® PLUS HRP reagent??
??

 

關(guān)于Enzo Life

Enzo Life做為分子診斷領(lǐng)域的*者,可提供包括基因、蛋白、細(xì)胞、組織全層面的標(biāo)記和檢測試劑,如原位雜交探針、活細(xì)胞熒光探針、組化試劑盒、小分子化學(xué)文庫等。除了科研領(lǐng)域外,Enzo Life還給提供多樣的生物工藝質(zhì)量檢測試劑盒(如Protein A殘留檢測盒,HCP殘留檢測等 )

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