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類器官包埋及HE染色實驗方法
我們辛辛苦苦養好的類器官，該如何做鑒定呢？通常是HE染色和免疫組化染色。今天小編帶大家了解一下類器官如何進行包埋及HE染色。
一、類器官收集
1、類器官收集（例如24孔板，收集1-2孔類器官，大約200-500個類器官）
2、4℃靜置 10min，離心棄去大部分上清
二、瓊脂糖凹槽制備
1、稱量0.2至0.4g瓊脂糖，加入至燒杯或者小試劑瓶內
2、加入10mL左右PBS
3、微波爐高火融化，每隔5s暫停打開，觀察，重復數次至瓊脂糖融化完
4、取約200uL融化瓊脂糖，加入至600uL 1.5ml EP管內（如下圖所示）
5、在盛有瓊脂糖的1.5ml EP管內插入一小0.5ml EP管，使瓊脂糖形成一圓尖底凹槽，室溫或者4℃冰箱靜置數分鐘，至瓊脂糖凝固，輕輕轉動小0.5ml EP管，取出0.5ml EP管，可看到瓊脂糖內形成一個深圓尖底槽。
6、吸取類器官沉淀置于凹槽底部，盡量包埋在中間位置。
7、加入PBS至高于瓊脂糖槽的邊緣。
三、類器官固定
四、類器官包埋
1、脫水：取出已凝固的含有類器官沉淀的瓊脂糖塊，在梯度乙醇中脫水，70%、80%、90%和95%乙醇各1h，100%乙醇30min，待其凝固；
2、融蠟：提前4h左右打開烘箱，65℃溶蠟；
3、透明：將脫水完成后的瓊脂糖塊轉移至組織包埋盒中（二甲苯處理前需一直浸泡在無水乙醇中），將包埋盒轉移至二甲苯中5min處理兩次；注：因二甲苯有毒性，需在通風良好區域進行操作，取出時盡量瀝盡殘留二甲苯。
4、浸蠟：透明化處理完成后立即轉入已經融化的蠟缸中，60℃浸蠟2h后，更換新的蠟缸再次浸蠟2h；
5、包埋：包埋在冰盒上進行，將融好的純蠟倒入蠟盒三分之一處，將瓊脂塊放置于中間位置，然后再滴蠟包埋直到倒滿。待蠟塊全凝固后，小心脫下模具。
五、類器官HE染色
1、石蠟切片脫蠟至水
依次將切片放入二甲苯I 10min；二甲苯Ⅱ10min；無水乙醇Ⅰ5min；無水乙醇Ⅱ5min；95%酒精5min；90%酒精5min；80%酒精5min；70%酒精5min；蒸餾水洗。
2、蘇木素染細胞核
切片入Harris蘇木素染3-8min，自來水洗。
3、伊紅染細胞質
切片入伊紅染液中染色1-3min，自來水洗。
4、脫水封片
將切片依次放入95%酒精I 5min ；95%酒精II 5min；無水乙醇Ⅰ5min ；無水乙醇Ⅱ5min ；二甲苯Ⅰ5min ；二甲苯Ⅱ5min中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片。
5、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析
六、類器官鑒定-HE染色結果（以肺癌為例）
人肺癌類器官
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| abs9222 | 伊紅染液 | 100ml |
| abs9214 | 蘇木素染液 | 100ml /500ml |
| abs9177 | 中性樹膠 | 100ml/ 100ml×10 |
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| abs7118 | 0.5ml離心管（無菌無酶） | 1袋/1箱 |
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| abs9445 | Organotial人結直腸癌類器官培養基試劑盒 | 1kit |
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