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前幾期小愛依次給大家介紹了螢光素酶報(bào)告基因相關(guān)知識，想必大家對于螢光素酶報(bào)告基因檢測技術(shù)有了一定了解。話不多說，本期小愛給大家安利另一款單螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒—愛必信海腎螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（abs60343）。

一、產(chǎn)品簡介

真核基因表達(dá)調(diào)控研究常用的方法是進(jìn)行報(bào)告基因的檢測，生物發(fā)光法又是報(bào)告基因檢測常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉(zhuǎn)化，并發(fā)射出光子。海腎螢光素酶跟螢火蟲螢光素酶類似，也是一胞內(nèi)蛋白，但是它從海腎中分離得到，大小為36kDa，發(fā)光作用原理也稍簡單：海腎螢光素酶只需要氧氣就可以催化腔腸素（反應(yīng)底物），氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide，并發(fā)出藍(lán)光，強(qiáng)發(fā)光波長為480nm。其作用反應(yīng)式為如圖2，海腎螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（abs60343）可為在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)提供快速、靈敏、穩(wěn)定的檢測方法。

圖2 海腎螢光素酶反應(yīng)化學(xué)式

二、產(chǎn)品信息

三、產(chǎn)品特點(diǎn)

1、快速：細(xì)胞裂解在 10-15 min 內(nèi)完成。
2、方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單。

四、實(shí)驗(yàn)流程

圖3 海腎螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒操作流程

五、具體應(yīng)用

海腎螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒的適用于單報(bào)告基因檢測，與螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因適用場景類似。具體的應(yīng)用場景包括而不局限于以下內(nèi)容：

圖4 海腎螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒的應(yīng)用舉例

六、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

使用海腎螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒與市面上同類產(chǎn)品進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)，檢測光信號RLU值，本公司產(chǎn)品檢測結(jié)果高于同類競品。

七、Q&A

1.檢測的螢光數(shù)值很低怎么辦？

（1）可能為轉(zhuǎn)染效率低

a.優(yōu)化轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)條件，用較易轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒做陽性對照（如轉(zhuǎn)染過表達(dá)螢光蛋白質(zhì)粒）；
b.確保轉(zhuǎn)染DNA的質(zhì)量，可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對DNA質(zhì)量進(jìn)行鑒定；
c.選擇活性較高，處于指數(shù)分裂期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

（2）可能為啟動(dòng)子活性低或誘導(dǎo)失敗
a.轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)使用特異性誘導(dǎo)啟動(dòng)子的條件；
b.優(yōu)化細(xì)胞的培養(yǎng)條件，提高螢光素酶的表達(dá)量；
c.更換強(qiáng)啟動(dòng)子（如SV40、CMV）。

（3）樣品裂解效率低
a.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間不宜過長，12-36h內(nèi)最好，長時(shí)間培養(yǎng)后，細(xì)胞可能會(huì)難裂解。
b.加入的裂解液需足量，保證細(xì)胞能夠充分裂解。

（4）檢測過程操作不規(guī)范
a.選擇合適的檢測儀器，能夠檢測化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都適用于該實(shí)驗(yàn)；
b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會(huì)造成檢測結(jié)果出現(xiàn)很大偏差；
c.室溫反應(yīng)。反應(yīng)時(shí)各個(gè)組分（細(xì)胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫；
d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測，盡量在30min內(nèi)完成。

（5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，螢火蟲螢光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；
b.反應(yīng)工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.進(jìn)行檢測的過程中，螢光信號值太高該如何進(jìn)行調(diào)整？
（1）減少質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量。

（2）細(xì)胞樣品裂解后，離心取上清后檢測或?qū)α呀猱a(chǎn)物進(jìn)行稀釋后檢測。
注：不建議通過減少底物量來降低螢光值，需要保證底物的飽和來反映螢光素酶真實(shí)的表達(dá)水平，否則會(huì)造成檢測結(jié)果出現(xiàn)大的偏差。

八、注意事項(xiàng)

1、使用前請將產(chǎn)品瞬時(shí)離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、由于溫度對酶反應(yīng)有影響，所以測定時(shí)，樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測定。
3、海腎螢光素酶催化的生物發(fā)光的zui強(qiáng)波長為480 nm，為防止孔間干擾，建議使用白色不透光孔板。

九、說明書

海腎螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（abs60343）

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