一種從熱帶木本植物中無毒組織研磨提取核酸的方法

閱讀：4654發(fā)布時間：2019-12-19

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詳細介紹

木本熱帶植物中含有大量復雜的有機化合物，這些有機化合物會抑制提取RNA或DNA所需的化學程序，從而不利于后續(xù)研究及應用，如RNA測序和基因表達分析。為了克服這個問題，研究人員必須使用CTAB / PVP緩沖液的提取方案，而不能使用市售的DNA / RNA提取試劑盒。但是，這種提取方式耗時長、需使用有毒化學品（例如苯酚和CHCl₃），并且一次只能處理少量樣品。為了克服這些問題，我們開發(fā)了一種基于CTAB / PVP的新方法，用于RNA或DNA提取，去掉了傳統(tǒng)方法中的苯酚/CHCl₃步驟。此外，該方法同樣適用于96孔深孔板，使用SPEX高通量組織研磨儀，一次研磨6塊深孔板，同時處理576個樣品，大大加快了處理速度。

我們的新方法，能夠從夏威夷果、牛油果和芒果組織中，成功提取RNA，這些組織使用傳統(tǒng)方法很難提取到RNA。而后我們還驗證了，該方法提取的RNA成功地合成cDNA，以進行實時定量PCR并生成高質量的RNA-Seq庫。該方法經輕微改動后，可用于從不同的熱帶和亞熱帶樹種中快速提取DNA。

這種方法可以更安全、更快速地從困難樣品中提取DNA和RNA，從而為將來在熱帶樹木上的研究提供了便利。