上海信帆生物科技有限公司
: 傳真: 地址:上海市閔行區虹梅南路2500 號
丙酮酸激酶（Pyruvatekinase，PK）試劑盒說明書
一、 測定意義
丙酮酸激酶酶催化糖酵解過程中的zui后一步反應，是糖酵解過程中的主要限速酶之一，
也是動植物組織中產生ATP 的關鍵酶之一，因此測定動植物組織中PK 的活性具有重要意義。
二、 測定原理
在二磷酸腺昔（ADP）存在的條件下丙酮酸激酶能夠催化磷酸烯醇丙酮酸（PEP）轉化
成丙酮酸，丙酮酸與2, 4 -二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，后者在堿性溶液中顯棕
紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比，由此計算丙酮酸激酶活力。三、試驗中所需的儀
器和設備
可見分光光度計或酶標儀、37℃恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比
色皿或酶標板、蒸餾水
四、試劑的組成和配制
試劑一：粉劑×1 瓶，常溫保存，用時加入50mL 雙蒸水溶解，4℃保存3 個月；試劑二：液
體13 mL×1 瓶，4℃保存3 個月；
試劑三：粉劑×1 支，常溫保存；用時加1mL 雙蒸水充分溶解;試劑四：
粉劑×1 支，-20℃保存；用時加1.2 mL雙蒸水充分溶解；試劑五：粉劑
×1 支，-20℃保存；用時加550μL 雙蒸水充分溶解；試劑六：2 mmol/L
標準液母液1mL，-20℃保存1 個月；試劑七：儲備液15 mL，4℃避光保
存3 個月；
試劑八：終止試劑50 mL，4℃保存3 個月；
五、粗酶液的提取
準確稱取組織重量，按重量體積比（g/mL）加9 倍試劑一，制成10%勻漿。8000g/min
離心10 min，取上清液待測，同時測定組織蛋白含量。
六、測定步驟
取試劑二11.4mL，試劑三0.69mL，試劑四1.2mL 加入混合液試劑瓶中，該試劑
上海信帆生物科技有限公司
: 傳真: 地址:上海市閔行區虹梅南路 2500 號
瓶中含有1.71mL液體，配成總體積為15mL的混合液（該混合液配好后4℃保存1個月），按下表進行操作。
空白孔B
標準孔S
測定孔U
對照孔C
待測樣本(μL)
10
10
混合液 (μL)
275
275
275
275
試劑五 (μL)
10
蒸餾水 (μL)
20
10
10
試劑六 (μL)
10
充分混勻，37℃水浴15 分鐘
試劑七(μL)
250
250
250
250
充分混勻，37℃水浴15 分鐘
試劑八(μL)
750
750
750
750
充分混勻，靜置3 分鐘，450 nm下測定吸光度
注意：
1. 以上反應體系用1 mL玻璃比色皿測定，若需要用酶標儀測定，將反應體系中各試劑組 成縮小5 倍即可。 2. 粗酶液的提取必須在0℃-4℃中操做完成，以防止酶變性失活。 3. 測定過程中所有試劑必須在冰上放置。
七、動植物組織中PK活力單位的計算：
丙酮酸標準曲線制作：
將2mmol/L的丙酮酸標準品用雙蒸水分別稀釋成1 mmol/L、0.8mmol/L、0.6mmol/L、0.4mmol/L、0.2mmol/L溶液，按照測定操作表中標準孔體系測定不同濃度的丙酮酸標準品的吸光值。
上海信帆生物科技有限公司
: 傳真: 地址:上海市閔行區虹梅南路 2500 號
計算標準曲線公式為y=0.4667χ-0.0013（χ為丙酮酸濃度，mmol/L； y為吸光值）推出：χ=（y+ 0.0013）÷0.4667（χ為丙酮酸濃度，mmol/L；y為吸光值） 單位定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘生成1 nmol丙酮酸定義為一個活力單位。
組織中PK活力= （U/mgprot）
（ODU- ODC）-0.00130.4667×15×Cprot
×1000
ODU： 測定孔吸光值； ODC： 對照孔吸光值： Cprot： 待測樣本蛋白濃度(mg/mL)； 15 分鐘： 反應時間；

www.shxfkj.com elisa試劑盒，進口elisa試劑盒，國產elisa試劑盒，elisa試劑盒價格，農殘檢測試劑盒，血清，進口血清 -上海信帆生物科技有限公司