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使用Vivacon 500 去除PCR反應之后的引物
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使用Vivacon 500 去除PCR反應之后的引物 |
PCR （聚合酶鏈式反應） 是在分子生物學領域應用非常廣泛的一種試驗方法，例如用于克隆片段準備、擴增DNA序列，法醫認證分析。這些應用可能或多或少地對PCR反應組分比較敏感。PCR反應組分含有多種鹽、自由核苷酸片段，甘油，蛋白、引物。特定的限制酶以及DNA連接酶對這些污染物比較敏感，因此，許多下游應用需要進行PCR產物清洗。 這篇應用文檔里，我們顯示使用Vivacon500超濾離心管可有效去除引物片段，30 kDa Hydrosart膜可以有效保留300 bp DNA的片段同時去除25 bp引物。 |
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材料方法 PCR樣品由100μg/ml 300 bp PCR 片段和2μM 25 bp引物溶于E緩沖液, pH 8.0, 50μl PCR 樣品和450 μl TE緩沖液被分別加樣到 4個Vivacon 500超濾離心管，然后5,000g離心15分鐘，然后再加入 450μl TE 緩沖液, pH 8 ，再次5,000g離心15分鐘再次離心條件為2,500g 20 s.隨后對引物去除情況進行12% TBE-Polyacrylamide SDS膠的電泳分析5μl原始樣品, *次離心產物，沖洗后離心產物，每個樣均做二次重復。 結果 SDS電顯示泳膠結果30 kDa Vivacon500超濾管可以有效去除引物，30分鐘實驗過程后300 bp PCR 片段可以有效回收，單次離心后 80%引物被去除，第二次離心后95%引物被去除。 使用30 kDa Vivacon500可以有效去除引物及PCR 反應組分，使300 bp 及以上DNA的片段PCR樣品適用于后續應用。 |
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12% TBE-Polyacrylamid SDS膠30 kDa Vivacon®500 |
Lane 1 300 bp DNA + 25 bp 引物 – 原始樣品 Lane 2 300 bp DNA + 25 bp 引物 – *次離心產物 （1） Lane 3 300 bp DNA + 25 bp 引物 – *次離心產物 （2） Lane 4 300 bp DNA + 25 bp 引物 – 沖洗后離心產物 （1） Lane 5 300 bp DNA + 25 bp 引物 – 沖洗后離心產物 （2） |
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