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mMESSAGE mMACHINE® Kit— — High Yield Capped RNA Transcription Kit
mMESSAGE mMACHINE® Kit— — High Yield Capped RNA Transcription Kit

地:Invitrogen

貨物所在地:上海上海市

更新時間:2025/3/12 21:00:48

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86-21-34615995
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www.yeasen.com

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供應簡介
mMESSAGE mMACHINE® high yield capped RNA轉錄試劑盒是Ambion公司的技術,專門設計用于體外高產量合成帽狀RNA(即合成RNA的5端帶帽狀結構),帽狀RNA模擬了大多數真核生物體內發現的mRNA結構。試劑盒內的帽狀類似物[m7G(5)ppp(5)G]與4種核苷酸混合在單一溶液內,簡化了反應步驟。


詳細介紹

 

理:
帽狀類似物:GTP經優化設計為1:4,zui大化轉錄生成RNA和帽狀RNA所占比例。20ul的反應體系加入1µg DNA模板在2h內可以體外合成15-35 µg 7-甲基鳥苷帽狀RNA,其產量是傳統體外轉錄反應的10-50倍。
勢:
1)一步法直接合成帶帽狀結構的RNA,其結構與大多數真核生物體內的mRNA結構相同;
2)試劑盒內酶混合液含RNase抑制劑,保護RNA不被降解;
3)試劑盒含對照模板(Xenopus elongation factor 1a, pTRI Xef),以檢測試劑盒的轉錄效率;
用:
帽狀RNA可直接用于下游實驗:顯微注射入卵母細胞,體外翻譯,轉染或者其他。
試劑盒成分:(25 reactions
1.75 ml Nuclease-free Water
50 μL Enzyme Mix (SP6, T7, or T3)50%甘油緩沖液含RNA聚合酶、Rnase抑制劑和其他。
50 μL10X Reaction Buffer (SP6, T7, or T3) ,含鹽類、緩沖液、DTT和其他成分。
250μL2X NTP/CAP (SP6, T7, or T3),一種中性緩沖液含有ATP/CTP/UTP/GTP/帽狀類似物。
100μL GTP20 mM in SP6 Kits; 30 mM in T3 and T7 Kits
100 μLTURBO DNase (2 U/μL)
10 μLpTRI-Xef, 0.5 mg/mL (Control Template)
1 mlAmmonium Acetate Stop Solution
1.4 mLLithium Chloride Precipitation Solution
實驗材料(自行準備):
DNA模板:待轉錄的DNA序列上游必須帶有正確的RNA聚合酶啟動位點T7T3SP6
標記核苷酸選擇性[α-32P] UTP or [α-32P]CTP可加入反應體系用作追蹤元素,方便定量檢測RNA合成量;
合成RNA純化試劑(選擇性):緩沖液或飽和酚/氯仿,異丙醇,離心柱;
DNA模板(注意事項):
1試劑盒選擇:根據帶轉錄的DNA序列上游帶有的RNA聚合酶啟動位點(T7T3SP6)選擇對應的試劑盒;
2模板濃度:推薦使用0.5 μg/μL水溶液或TE溶液;
3模板大小:*長度是0.3-5.0kb,可用于更長或更短的模板,需適當調整反應條件;
4模板方向:若合成sense RNA(正義RNA),使用RNA聚合酶對應的細菌啟動子在5端或者蛋白質編碼區的N末端;如果模板含有質粒,經多克隆位點內切酶線性化后啟動子處于相反位置;若合成antisense RNA(反義RNA),使用RNA聚合酶對應的細菌啟動子在3或者蛋白質編碼區的C末端;
產品信息:現貨供應!

貨號
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報價
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庫存
AM1340
mMESSAGE mMACHINE® SP6 Kit
Invitrogen
25T
6210
5279
AM1344
mMESSAGE mMACHINE® T7 Kit
Invitrogen
25T
6210
5279
3~4
AM1348
mMESSAGE mMACHINE® T3 Kit
Invitrogen
25T
6210
5279
3~4

參考文獻:
Aziz RB and Soreq H (1990) Improving poor in vitro transcription from GC-rich genes. Nucl. Acids Res. 18:3418.
Browning KS (1989) Transcription and translation of mRNA from polymerase chain reaction-generated DNA.Amplifications 3: 14–15.
Krieg PA and Melton DA (1987) In vitro RNA synthesis with SP6 RNA polymerase. Meth. Enzymol. 155:397–415.
Krieg PA (1990) Improved Synthesis of Full-Length RNA Probes at Reduced Incubation Temperatures. Nucl. Acids Res. 18: 6463.
Milligan JF, Groebe DR, Witherell GW, and Uhlenbeck OC (1987) Oligoribonucleotide synthesis using T7 RNA polymerase and synthetic DNA template. Nucl. Acids Res. 15: 8783–8798.
Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd edition. (1989) editor C Nolan, Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Mullis KB, and Faloona F (1987) Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase catalyzed chain reaction. Meth. Enzymol. 155: 335–350.
Schenborn ET and Mierindorf RC (1985) A novel transcription property of SP6 and T7 RNA polymerases: dependence on template structure. Nucl. Acids Res. 13: 6223–6236.
Stoflet ES, Koeberl DD, Sarkar G, and Sommer SS (1988) Genomic amplification with transcript sequencing. Science 239: 491–494.

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