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翌圣生物科技（上海）股份有限

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供應簡介

報告基因檢測是現代分子生物學研究領域中分析結構基因旁側區域潛在的順式元件（如啟動子、增強子和沉默子等）和反式作用因子相互作用關系的一種重要工具。吉滿生物生產的雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒（DualLuciferase Reporter Gene Aassy Kit），是一種結合螢火蟲和海腎熒光素酶檢測的先進輔助報告基因技術。

詳細介紹

雖然螢火蟲和海腎熒光素酶都具有生物發光報告基因的檢測特點，但它們卻具有*不同的進化起源，因而它們的酶結構和底物要求*不同。我們利用這一特點，將它們配合起來使用，即可形成十分有效的雙熒光素酶報告基因系統，其中Renilla Luciferase通常作為內對照。它的實驗原理是先通過螢火蟲熒光素（luciferin）為底物來檢測螢火蟲熒光素酶。熒光素酶在Mg²⁺和O₂參與下催化熒光素氧化成oxyluciferin,在熒光素的氧化過程中，發出生物熒光（bioluminomescence）。然后在后續實驗中加入抑制螢火蟲熒光素酶催化熒光素發光的物質，來終止螢火蟲熒光素的生物熒光，同時加入海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）的底物coelenterazine。通過熒光素酶的催化氧化成coelenteramide發出生物熒光。然后通過化學發光儀或液閃測定儀測定生物熒光。

產品特點：

● 簡便，快捷。

● 靈敏度高，可檢測10^-20mol的螢火蟲熒光素酶和3×10^-19mol的海腎熒光素酶。

● 安全，非放射性。

● 酶的濃度線性范圍可達7個數量級。

● 準確性高：使用海腎熒光素酶作為對照可以大大降低細胞數量，生長狀態和轉染效率等對實驗結果的影響。

注：Luciferase Assay Reagent避光保存，不能反復凍融。

保存條件：

未拆封試劑盒-20℃避光保存，有效期為6個月；-70℃避光保存，有效期為一年。

實驗步驟：

1. 細胞裂解：

（1）. 將轉入報告基因的細胞中的培養基移除，加PBS輕輕洗滌。按如下方案加入Cell Lysis Buffer，將培養板放在微型振蕩器上室溫振蕩15min，充分裂解細胞。

96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板
30μl	60μl	120μl	250μl	500μl

注：裂解產物可室溫保存6小時，4℃保存16小時，-70℃可長期存放。（裂解產物不能多次反復凍融）

（2）. 將充分裂解后的裂解產物，10,000-15,000rpm離心3-5min。去離心后的上清液移入新的EP管進行后續檢測。

2. Renilla Luciferase Assay 工作液的配置：

按照樣品要求的量，將Renilla Luciferase Assay Reagent（100×）按照稀釋比例加入Renilla Luciferase Assay buffer，混勻后室溫放置。

3. 熒光素酶檢測：

（1）. 按照儀器說明書要求將熒光檢測打開，設定參數測定時間為10s，測定間隔為2s。

（2）. 將樣品按照20～100μl的體積加入測量管中（保持樣品的加樣量*），另外加入100μl Luciferase Assay Reagent混勻2-3次（不能漩渦混勻），充分混勻后測定RLU（Relative light unit），同時設置Cell Lysis buffer為空白對照孔。

（3）. 將檢測后的樣品，加入100μl配制的Renilla Luciferase Assay工作液混勻2-3次，充分混勻后測定RLU，同時設置Renilla Luciferase Assay工作液為空白對照孔。

（4）. 將（2）檢測的RLU值與（3）檢測出的RLU值進行比較，通過得出的比值來確定報告基因的激活程度。

注意事項：

1. 溫度會對酶的活性會產生影響，因此所有試劑應放置室溫后再使用，但海腎熒光素酶底物應置于冰浴。

2. Renilla Luciferase Assay 工作液需現配先用，不能反復凍融。

3. 螢火蟲熒光素酶催化的生物發光的zui強發光波長為560nm，海腎熒光素酶催化的生物發光的zui強發光波長為465nm。

產品價格：

貨號	名稱	產地	規格	報價/元	*/元
GM-040502A	Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒	Genomeditech	100次	689.00	551.20
GM-040502B	Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒	Genomeditech	500次	2,259.00	1,807.20
GM-040502C	Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒	Genomeditech	1000次	4,296.00	3,436.80

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