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HieffTM Taq DNA Polymerase DNA聚合酶
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
HieffTM Taq DNA Polymerase DNA聚合酶 | 10101ES80 | 1000 U | 109.00 |
HieffTM Taq DNA Polymerase DNA聚合酶 | 10101ES90 | 5×1000 U | 459.00 |
產品描述
HieffTM Taq DNA Polymerase是嗜熱性Thermus aquaticus表達的熱穩定重組型DNA聚合酶，分子量為94 KD。具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，無3’→5’外切酶活性。擴增產物具有3′-dA，可直接用于TA克隆。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
10101ES80（1000 U） | 10101ES90（5×1000 U） | ||
10101-A | 10×Taq Buffer (Mg2+ Free) | 1 mL×4 | 1 mL×20 |
10101-B | 25 mM MgCl2 | 1 mL×2 | 1 mL×10 |
10101-C | HieffTM Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 200 μL | 200 μL×5 |
產品應用
基因型鑒定、菌落PCR等常規PCR。
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃，30 min內，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：20 μL反應體系，10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ，74 ºC下孵育1 h，DNA的電泳譜帶無變化。
核酸內切酶殘留檢測：20 μL反應體系，10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA，74 ºC下孵育1 h，DNA的電泳譜帶無變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測: 50 μL體系中，加入2 U本品，以無菌ddH2O為模板，擴增E.coil 16s rDNA基因。35個循環后擴增產物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴增條帶。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20 ºC保存。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
PCR反應體系（冰上配制）
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
ddH2O | to 50 | - |
10×Taq Buffer(Mg2+ Free) | 5 | 1× |
25 mM MgCl2 | 3 | 1.5 mM |
dNTP Mix (10 mM each) | 1 μL | 0.2 mM |
模板DNA | optional | - |
引物1(10 μM) | 2 μL | 0.4 mM |
引物2(10 μM) | 2 μL | 0.4 mM |
HieffTM Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.4 μL | 0.04 U/μL |
【注】：1）Mg2+ 終濃度：Mg2+*濃度為1.5-2 mM，如有需要，可0.2-0.5 mM為間隔向上摸索Mg2+*使用濃度。
2）聚合酶添加：室溫下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性，為了防止非特異性擴增，建議將聚合酶在zui后一步加到反應體系中。
3）聚合酶濃度：推薦使用0.04 U/μL。可以在0.025-0.04 U/ μL之間進行優化。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應體系）：
模板種類 | 擴增片段 |
基因組DNA | 50 ng～100 ng |
質粒DNA | 10 pg～20 ng |
cDNA | 1~5 μL（不超過反應體系的1/10） |
PCR擴增程序
循環步驟 | 溫度（ºC） | 時間 | 循環數 |
預變性 | 94 | 30 sec-5 min | 1 |
變性 | 94 | 30 sec | 35 |
退火 | 50-60 | 30 sec | |
延伸 | 72 | 60 sec/kb | |
終延伸 | 72 | 10 min | 1 |
【注】：1）預變性溫度和時間：推薦使用94℃。預變性推薦時間：質粒DNA等簡單模板為30 sec；cDNA、基因組DNA等復雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的zui適溫度。推薦退火時間設置為20 sec，可以在10-30 sec內調節。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。
3）擴增產物：請將PCR擴增產物放置于-20℃保存，防止DNA發生降解。
HB171127
翌圣生物科技（上海）股份有限公司 - 主營產品： 抗體,小分子抑制劑,熒光染料,干細胞培養,血清
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