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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
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產品介紹
產品簡介
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎上通過基因工程技術得到的全新逆轉錄酶，與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其速度和穩定性大幅度提高。此外，該產品經過翌圣生物特別研發的精制工藝處理，產品中核酸酶、宿主gDNA以及其他背景菌gDNA殘留極低，適用于快速全預混RT-qPCR試劑開發。
產品信息
貨號 | 14614ES92 / 14614ES97 / 14614ES98 |
規格 | 10 KU / 100 KU / 200 KU |
單位定義 | 以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。 |
組分信息
組分名稱 | 14614ES92 | 14614ES97 | 14614ES98 |
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 500 μL | 1 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
1.兩步法RT-PCR/qPCR（第一鏈cDNA合成）
1）RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結構，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產量。）
組分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | to 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL or 1 μL or 1 μL |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng |
65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應液后，加入下表中的逆轉錄反應液，并輕輕吹打混勻。
2）逆轉錄反應體系配制（20 μL體系）
組分 | 使用量 |
上一步的反應液 | 13 μL |
5×RT Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 200 U |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
RNase free ddH2O | To 20 μL |
3）逆轉錄程序設置
溫度 | 時間 |
25℃* | 5 min |
42℃** | 15-30 min |
85℃*** | 5 min |
*當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
**逆轉錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復雜二級結構的模板，可將逆轉錄溫度提高至50-60℃。
***85℃加熱5 min，目的是使逆轉錄酶失活。
4）逆轉錄產物可立即用于后續PCR或qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。
2.一步法RT-PCR/qPCR
該逆轉錄酶適用于一步法RT-PCR/qPCR，推薦每25 μL反應體系，添加10-40 U逆轉錄酶，最適逆轉錄條件為50℃ 15min，也可根據實際情況逐步增加逆轉錄酶用量，多重體系建議提高酶量。
注意事項
1. 請保持實驗區域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染。
2. 所有操作均應在冰上進行，防止RNA降解。
3. 為保證高效率逆轉錄，建議使用高質量的RNA樣本。
4. 本產品僅用作科研用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
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