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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 兩周 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
|---|
產品介紹
產品簡介
本試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA），用于體外定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中載脂蛋白B（ApoB）的含量。需要往預先包被大鼠載脂蛋白B（ApoB）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過孵育并洗滌。再用底物四甲基聯苯胺（TMB）顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠載脂蛋白B（ApoB）呈正相關，用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
翌圣生物提供大鼠載脂蛋白B(ApoB)ELISA試劑盒（60411ES）、小鼠載脂蛋白B(ApoB)ELISA試劑盒（60412ES）和人載脂蛋白B(ApoB)ELISA試劑盒（60413ES）。
產品信息
貨號 | 60411ES48/60411ES59 |
規格 | 48 T/96 T |
檢測時長 | 1.5 h |
檢測范圍 | 10 μg/mL–320 μg/mL |
靈敏度 | 檢測濃度小于1.0 μg/mL |
板內變異系數 | 小于10% |
板間變異系數 | 小于15% |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 48 T | 96 T |
60411ES-A | 微孔酶標板 | 12孔 x 4條 | 12孔 x 8條 |
60411ES-B | 標準品 | 0.3 mL x 6管 | 0.3 mL x 6管 |
60411ES-C | 稀釋液 | 3 mL | 6 mL |
60411ES-D | 檢測抗體-HRP | 5 mL | 10 mL |
60411ES-E | 20x洗滌緩沖液 | 15 mL | 25 mL |
60411ES-F | 底物 A | 3 mL | 6 mL |
60411ES-G | 底物 B | 3 mL | 6 mL |
60411ES-H | 終止液 | 3 mL | 6 mL |
60411ES-I | 封板膜 | 2張 | 2張 |
60411ES-J | 自封袋 | 1個 | 1個 |
備注：
1）標準品濃度依次為：320、160、80、40、20、10 μg/mL 。
2）已經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50 μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
儲存條件
2～8℃保存，有效期6個月。
使用說明
1.樣本處理及要求
1.1血清
將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2 h或4℃過夜，然后1000 g離心20 min，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
1.2血漿
用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30 min內于2～8℃ 1000 g離心15 min，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
1.3組織勻漿
用預冷的PBS (0.01 M, pH 7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后剪碎組織。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1 g的組織樣品對應9 mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000 g離心5～10 min，取上清檢測。
1.4細胞培養物上清或其它生物標本
1000 g離心20 min，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。【注】標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
2.需要的試劑和器材
酶標儀（450 nm）、高精度加樣器及槍頭：0.5-10 μL、2-20 μL、20-200 μL、200-1000 μL 、37℃恒溫箱、蒸餾水或去離子水。
3.試劑準備
所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后需立即冷藏保存試劑。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
4.使用方法
4.1從室溫平衡20 min后從鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
4.2設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50 μL；
4.3樣本孔中加入待測樣本 50 μL；空白孔不加。
4.4除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100 μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60 min。
4.5棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350 μL），靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
4.6每孔加入底物 A、B各50 μL，37℃避光孵育15 min。
4.7每孔加入終止液 50 μL，15 min內，在 450 nm 波長處測定各孔的OD值。
5.實驗結果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
6.試劑盒性能
6.1檢測范圍：10 μg/mL–320 μg/mL。
6.2靈敏度：檢測濃度小于 1.0 μg/mL。
6.3特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
6.4重復性：板內變異系數小于10%，板間變異系數小于15%。
7.操作總結
注意事項
1.嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果，所有試劑都必須在使用前達到室溫20～25℃，使用后立即冷藏保存試劑。
2.洗板不正確可能會導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體，溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3.需要消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4.底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8.任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體，任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導致ELISA實驗結果偏差。
10.若樣本為細胞培養上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態、細胞數量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。
11.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。
12.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產品。
13.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
14.本產品僅作科研用途！
Ver.CN20241217
