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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
|---|
產品介紹
Hieff NGS® Methyl-seq DNA Library Prep Kit for Illumina V2是針對Illumina®測序平臺專業開發設計的新一代DNA甲基化建庫試劑盒，在前一代建庫試劑盒的基礎上，改善了接頭連接效率，并采用了更加新型的高保真酶，顯著提高擴增均一性和保真性。適用于各種經Bisulfite處理的樣本類型，包括gDNA、FFPE DNA、cell free DNA (cfDNA)、ChIP DNA等，可以滿足Bisulfite處理后的10 pg~250 ng DNA樣本建庫。該試劑盒可兼容短至40 bp的DNA樣本。本產品不僅更加經濟，同時也提供了簡便快速的建庫流程，一般在2小時左右可以完成正常建庫。
運輸與保存方法
冰袋運輸。所有組分-20 °C保存，有效期1年。
注意事項
一、關于操作
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 請于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。
3. 配制各步驟反應液時推薦使用移液器吹打混勻或輕輕振蕩，劇烈振蕩可能會造成文庫產出下降。
4. 為避免樣品交叉污染，推薦使用帶濾芯的槍頭，吸取不同樣品時請更換槍頭。
5. 推薦在帶熱蓋的PCR儀中進行各步驟反應，使用前應預熱PCR儀至反應溫度附近。
6. PCR產物因操作不當極容易產生氣溶膠污染，進而影響實驗結果準確性。推薦將PCR反應體系配制區和PCR產物純化檢測區進行強制性的物理隔離；使用專用的移液器等設備；并定時對各實驗區域進行清潔（使用0.5%次氯酸鈉或10%漂白劑進行擦拭清理），以保證實驗環境的潔凈度。
7. 本產品僅作科研用途！
案例展示
a. gDNA樣本建庫示例
圖 2：human gDNA 樣本 bisulfite 處理后的 Aligent 2100 建庫示意圖
注：50 ng human gDNA使用ZYMO EZ DNA Methylation-Gold Kit (D5005)處理后，全部投入建庫，PCR 擴增10 cycle 得到的文庫產量約為20×58.2 ng；
b. FFPE DNA樣本建庫示例
圖 3：FFPE DNA 樣本bisulfite 處理后的 Aligent 2100 建庫示意圖
注：50 ng FFPE DNA 使用ZYMO EZ DNA Methylation-Gold Kit (D5005)處理后，全部投入建庫，PCR 擴增 10 cycle 得到的文庫產量約為 20×74.8 ng；
c. cfDNA樣本建庫示例
圖 4：cfDNA 樣本 bisulfite 處理后的 Aligent 2100 建庫示意圖
注：10ng cfDNA 使用 ZYMO EZ DNA Methylation-Gold Kit (D5005)處理后，全部投入建庫，PCR 擴增 11 cycle 得到的文庫產量約為 20×54.4 ng；
常見問題
DNA 文庫產量偏低，出現接頭二聚體，大片段等問題，可以考慮從如下方面進行優化：
a)文庫產量偏低，應考慮樣本溶液中含有酶抑制劑組分，建議再次純化；
b)文庫出現接頭二聚體，推薦在互補鏈延伸之后進行2輪純化，在第一輪純化后用50 μL洗脫，然后加入1.2×beads (60 μL)進行再次純化；
c)對于文庫大片段的出現，考慮是過度擴增引起，可以適當減少擴增循環數。
