聯(lián)系電話
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級會員·12年您現(xiàn)在的位置： 翌圣生物科技（上海）股份有限公司>>細胞生物學>> 16816ESHieff® Fast Cell Direct qPCR set (for probe)
16816ESHieff® Fast Cell Direct qPCR set (for probe)
| 參考價 | ￥615 |
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 16816ES 型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
規(guī)格
| 2 mL | 615元 | 99 件 可售 |
訪問次數(shù)：205更新時間：2024-01-17 10:03:17
聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
- 聯(lián)系人：
- 曹女士
- 電話：
- 400-6111-883
- 手機：
- 售后：
- 4006-111-883
- 傳真：
- 86-21-34615995
- 地址：
- 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號3樓
- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
掃一掃訪問手機商鋪
產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 兩周 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品介紹
Hieff® Fast Cell Direct Probe RT-qPCR Kit 適用于對各種動物細胞進行基因定量表達分析（如cell line 化的貼壁細胞和懸浮細胞、原代培養(yǎng)細胞、各種干細胞、iPS 細胞等），無需提RNA，可直接進行qPCR表達分析，用時短，操作簡單，出錯率低，最短只需1.5 h就可高效完成從模板制備到反轉(zhuǎn)錄反應及基因表達分析等步驟。該產(chǎn)品為探針法細胞直擴RT-qPCR試劑盒的熒光定量qPCR模塊，為補充試劑。
儲存條件
長期保存時請于-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
一、裂解產(chǎn)物的制備
將試劑放置室溫下融化，使用前上下顛倒，輕輕混勻，并輕微離心后使用，避免起泡。沒有混勻試劑、使用振蕩器混勻、未在冰上配置試劑等會導致反應性能下降。
將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中*，5000 rpm離心2 min收集細胞**，充分吸除培養(yǎng)基。若貼壁細胞在96孔板中培養(yǎng)，可直接吸除培養(yǎng)基。
各個孔內(nèi)加入FCD Washing Buffer 150 μL，吸打清洗細胞，5000 rpm離心2 min，吸盡FCD Washing Buffer。
各孔中加入48 μL FCD Lysis Buffer溶液，2 μL DNase I溶液，室溫吸打混勻后靜置5 min，孵育后加入2.5 μL FCD Stop Solution***, 吸打混勻5次左右，即可得到裂解產(chǎn)物****，細胞數(shù)量超過1× 105 cells時可能會有裂解殘留物屬正常現(xiàn)象。
*50 μL裂解體系適配細胞數(shù)的基本要求是每孔1× 102 - 1× 105 cells，若細胞數(shù)量較多，可適當?shù)缺壤黾覨CD Lysis Buffer溶液和DNase Ⅰ溶液的用量。
**不同細胞的離心條件不同，請使用適合于所用細胞的離心速度進行離心。
***50 μL的裂解液需加入2.5 μL的FCD Stop Solution。依實驗需要，加入裂解液量增大時需相應增大FCD Stop Solution的量。
****細胞裂解產(chǎn)物溶液長期保存時，請置于-25~-15℃。
二、反轉(zhuǎn)錄
室溫融化4× Hifair® FCD RT Mix后輕微顛倒混勻，置于冰上并按下表配置反應體系：
組分 | 體積 （μL） | 終濃度 |
4× Hifair® FCD RT Mix | 5 | 1× |
裂解產(chǎn)物* | x | - |
RNase-free H2O | Up to 20 | - |
表1 反轉(zhuǎn)錄反應體系
*避免吸入細胞碎片，推薦使用量為2 μl，最大不超過反應體系的55%。
移液器輕輕混勻上述配制的反應液，按下表程序進行反轉(zhuǎn)錄反應**：
反應溫度 | 反應時間 |
37℃ | 5 min |
85℃ | 5 sec |
表2 反轉(zhuǎn)錄反應程序
**反轉(zhuǎn)錄溫度推薦使用37℃，反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接進行下游qRT-PCR檢測。為避免反轉(zhuǎn)錄體系對qPCR反應的抑制，得到合適的Ct值（10-35），可將產(chǎn)物稀釋10-1000倍后使用。若短時間內(nèi)不進行下游實驗，可放置于-25~-15℃保存。
三、熒光定量PCR
體系配置
使用下列組份比例配制反應液（配制過程請于冰上進行）：
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Hieff® FCD Probe qPCR Mix | 12.5 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 200 nM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 200 nM |
Probe (10 μM) | 0.25-1 | 100-400 nM |
反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物* | x | - |
RNase-free H2O | Up to 25 | - |
表3 qPCR反應體系
*高濃度模板易導致非特異擴增，可適當將模板稀釋5-50倍。模板推薦用量4 μL。反應性能較差時，可以在0.2-1.0 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物探針濃度。
熒光定量PCR快速擴增程序（推薦）
本產(chǎn)品推薦使用快速程序擴增，可大大減少反應時間。使用Tm值較低的引物難以擴增時，可額外調(diào)整退火溫度。
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 95℃ | 10 sec | 1 |
變性 | 95℃ |
| 45 |
退火/延伸** | 60℃ | 10 sec |
表4 qPCR反應程序（快速）
**退火/延伸溫度、終延伸時間可根據(jù)實驗要求適當調(diào)整。 快速程序適用于絕大多數(shù)基因，個別復雜二級結(jié)構(gòu)基因可嘗試常規(guī)程序。
熒光定量PCR常規(guī)擴增程序
實驗儀器不滿足快速反應時間時，也可使用常規(guī)程序進行擴增。
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 95℃ | 10 sec | 1 |
變性 | 95℃ |
| 40-45 |
退火/延伸** | 60℃ | 30 sec |
表5 qPCR反應程序（常規(guī)）
注意事項
使用前，將凍存的各組分充分融解并輕輕混勻后使用。
實驗時，請盡量使用無污染的耗材，避免污染。
本產(chǎn)品避免反復凍融，配制時應避免強光照射。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅作科研用途！
